【摘 要】
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脂质代谢平衡对维持生命体正常生长发育非常重要。boxH/ACAsnoRNP是一类小核仁核蛋白复合体，其功能主要是rRNA假尿嘧啶修饰、转录后基因沉默和端粒酶活性维持，其中包含Naf1,Nop10,Nhp2,Dck1和GAR1这五个关键蛋白。本研究以果蝇为模式生物，对Gar1在脂肪代谢和个体发育中的作用展开研究。结果如下：
(1)构建了pUAST-attB-GAR1-eGFP载体，显微注射获得转基因果蝇。通过DAPI和Phalloidin-FITC染色标记细胞核和细胞骨架，检测到GAR1-eGFP
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脂质代谢平衡对维持生命体正常生长发育非常重要。boxH/ACAsnoRNP是一类小核仁核蛋白复合体，其功能主要是rRNA假尿嘧啶修饰、转录后基因沉默和端粒酶活性维持，其中包含Naf1,Nop10,Nhp2,Dck1和GAR1这五个关键蛋白。本研究以果蝇为模式生物，对Gar1在脂肪代谢和个体发育中的作用展开研究。结果如下：
(1)构建了pUAST-attB-GAR1-eGFP载体，显微注射获得转基因果蝇。通过DAPI和Phalloidin-FITC染色标记细胞核和细胞骨架，检测到GAR1-eGFP融合蛋白定位在细胞核中，呈颗粒状分散分布。
(2)利用CRISPR-Cas9技术，获得了Gar1基因的3个缺失突变体，分别记为gar11、gar12和gar13。突变体表现出严重的体型减小，产卵后120小时的幼虫体长只有对照组1/3左右，多数幼虫在第6天死亡。
(3)用ppl-GAL4驱动Gar1在脂肪体、唾液腺和肠道中基因沉默，发现3龄幼虫晚期的脂肪体中的脂滴减小，表明Gar1在脂肪体中的功能是正调控脂肪储存。其中两个Gar1RNAi品系在基因沉默后死亡在蛹期，表明Gar1的脂肪储存异常可能导致个体发育缺陷。
(4)随后，检测了Nop10,Nhp2,Naf1的RNAi突变体，发现这3个突变体均表现出脂滴减小的表型，经统计分析有显著差异。表明它们作为一个复合体共同参与脂肪储存的调控。
(5)通过差异基因表达谱分析，筛选到46个胰岛素通路相关基因进行了体内遗传互作验证。发现Lin-28的基因敲低可以回复Gar1沉默后引起的脂滴变小的表型。同时发现在gar1缺失突变体中，Lin-28的表达量上调，表明Lin-28可能位于Gar1的下游。上述结果提示Gar1可能通过Lin-28调控脂肪储存和个体发育。
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