骨髓基质细胞与奥拉西坦联合治疗脑缺血大鼠及对VEGF表达影响的研究

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zx2353
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缺血性脑血管疾病具有发病率高、致残率高和死亡率高的特点,严重威胁着人类健康。传统观念认为神经细胞不能再生,因而目前针对缺血性脑血管疾病的溶栓、抗凝及神经保护等治疗手段不能从根本上切实有效的修复受损的脑组织。  骨髓基质细胞(Bone marrow stromal cells,BMSCs)和间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)是成体骨髓中的一类多能干细胞,具有干细胞和祖细胞的性质[1]。BMSCs能自我更新和多向分化,不仅能分化为造血细胞支持造血,还能在不同的微环境下分化为多种靶细胞,是多种疾病的细胞治疗和基因治疗的基础。研究显示BMSCs能改善多种中枢神经系统疾病,如帕金森病、脑外伤、脊髓损伤、多发硬化的神经功能[2],其在神经系统疾病中的应用前景越来越受到人们的关注。  而奥拉西坦能够激活腺苷酸激酶,同时能够促进脑细胞的代谢,提高大脑细胞对氧和葡萄糖的利用,具有保护和修复脑细胞的作用。  Chen等将MSCs和Caspases的细胞渗透抑制剂ZVAD一起注入缺血2小时再灌注24小时MCAO大鼠脑内,以治疗大鼠局灶性脑梗死,结果发现联合治疗组的大鼠神经功能恢复明显优于单纯应用骨髓基质细胞组。因此我们联合应用骨髓基质细胞与奥拉西坦来治疗大鼠局灶性脑缺血,观察两者是否可以同样产生协同作用,同时检测具有神经保护作用的血管内皮生长因子(VEGF)的表达是否增加,从而为脑梗死的治疗开辟一条新途径。  方法:将40只成年雌性SD大鼠制备成大脑中动脉缺血2小时再灌注24小时动物模型,按随机原则分为4组:A、(梗塞对照组)B、(BMSCs组)C、(奥拉西坦组)和D、(BMSCs+奥拉西坦组),每组10只。每组再按缺血再灌注后3天,7天分为2个亚组,每组5只。A组,模型制备成功后,不给予任何干预,自由饮食。B组和D组于缺血再灌注24h后经尾静脉给予BMSC3×106。C组和D组于缺血再灌注后每天经腹腔给予奥拉西坦注射液(800mg/kg),所有大鼠用于缺血再灌注1天,3天和7天进行神经功能评分,免疫组化法测定VEGF表达水平,和TUNEL法测定凋亡细胞分布。  结果:  1、神经功能评分:再灌注3d、7d后各治疗组神经功能评分明显低于梗塞对照组(P<0.05),而3d时BMSC+奥拉西坦组神经功能评分明显低于BMSC组及奥拉西坦组(P<0.05)。  2、VEGF免疫组织化学染色:再灌注后3d、7d,治疗组的缺血区表达VEGF的细胞较梗塞对照组明显增多(P<0.05),而BMSCs+奥拉西坦组明显多于BMSC组及奥拉西坦组(P<0.05);  3、TUNEL细胞凋亡:染色:再灌注后3d,梗塞对照组大鼠缺血侧可见许多凋亡细胞,明显多于治疗组(P<0.05),而BMSC组及奥拉西坦组凋亡细胞明显多于BMSCs+奥拉西坦组(P<0.05)。  结论:  1、BMSCs和奥拉西坦联合治疗脑梗死可以促进神经功能的恢复、增加VEGF的表达以及减少细胞的凋亡。  2、BMSCs和奥拉西坦联合治疗脑梗死可产生协同作用。
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