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岩沙海葵毒素(palytoxin，PTX)是迄今为止发现的毒性最高的海洋生物毒素之一，PTX富含于软珊瑚、岩沙海葵、TriggerFishMelichtysVidua、SeaAnemonesRadianthusMacrodactylus、P.tuberculosa、generaPalythoa、Zoanthus、Mamillosa、P.caribdea、玫瑰海葵等多种海洋生物中。近年来，尤其是沿海城市的居民愈来愈热衷于食用海鲜产品，导致误食这类毒素的可能性逐渐增加。因此，建立快速、准确的岩沙海葵毒素免疫检测方法，从海产品中快速检测出岩沙海葵毒素对预防食物中毒的发生十分迫切。
目的：制备PTX多抗血清，纯化并酶标，以多抗血清为基础建立PTX直接酶联免疫吸附检测(ELISA)方法，初步探索此方法应用于海洋生物尤其是海鲜食品中岩沙海葵毒素含量的检测，并拟建立分泌抗PTX单克隆抗体的杂交瘤细胞株，为建立PTX双抗夹心ELISA检测方法提供条件，为今后进一步探讨PTX单克隆抗体ELISA法运用于食品中岩沙海葵毒素早期筛查奠定基础。方法：采用化学偶联法将纯品毒素PTX与大分子蛋白质匙眼血蓝蛋白(KLH)偶联成为免疫抗原，诱导BALB/c小鼠产生多价抗血清，将融合前获取的小鼠多价抗血清用梯度硫酸铵溶液、Protein-A亲和层析纯化，并经SDS电泳和Western-blot等方法分析鉴定，利用改良碘化钠法以辣根过氧化物酶(HRP)标记PTX多抗；以PTX纯毒素作为包被抗原，HRP标记的多价抗血清为酶标抗体，建立PTX多抗直接ELISA检测方法。同时用免疫后的小鼠脾细胞与同系小鼠骨髓瘤细胞(NS-1)融合，并克隆化，拟制备小鼠PTX单克隆抗体。结果：采用化学偶联法制备的PTX纯毒素人工抗原，经连续紫外分光光度计检测，证明偶联成功。经过7次免疫后，小鼠多抗血清效价达到1：5000，以梯度硫酸铵法及亲和层析法纯化PTX多抗血清，SDS-PAGE分析显示纯化后去掉了大部分杂蛋白，免疫印迹分析抗体纯度较高；制备的抗PTX多价抗血清，经纯化后与HRP标记成功；以此为基础建立了PTX多抗直接ELISA检测法，其酶标多抗最佳工作浓度为1:80。采用本研究建立的PTX多抗直接ELISA法检测PTX纯品毒素和剥皮鱼、大黄鱼、罗氏沼虾、锯缘青蟹、牡蛎、海带等6种海鲜食品，发现本方法对PTX纯品毒素检测结果呈强阳性，而6种海鲜产品中未检测到含有PTX成分。初次融合及经2次有限稀释后的杂交瘤细胞能稳定分泌抗PTX抗体。结论：本研究制备的PTX人工免疫抗原具有较高的特异性和免疫原性，多克隆抗体为特异性抗PTX抗体，PTX多抗直接ELISA检测法对PTX的检测可达到5～10ng水平，检测PTX纯品毒素结果可靠；该法是否具有应用于海鲜产品中PTX快速检测的可行性，有待进一步研究证实。