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目的:观察人脐带间充质干细胞(human umbilical cord blood mesenchymal stem cells,hUCMSCs)来源的外泌体对高糖作用下的视网膜色素上皮细胞(retina pigment epithelial,RPE)的细胞间粘附分子-1(Intercellular adhesion molecule,ICAM-1)及血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响。方法:1.hUCMSCs来源的外泌体的提取和鉴定。应用低温梯度超速离心法分离hUCMSCs培养液,获得上清液中的外泌体,通过应用蛋白免疫印记法(Western blot,WB)来检测泌体表面蛋白CD63、hUCMSCs表面蛋白CD90的表达以鉴定外泌体来源。2.ARPE-19细胞高糖损伤模型的建立。取生长良好的ARPE-19细胞,以不同浓度葡萄糖培养,随机分为五组,1组对照组:5.5 mmol/L,2组:20.0mmol/L;3组:35.0 mmol/L:4组:50.0mmol/L;5组高渗组:5.5mmol/L+甘露醇24.4mmol/L;MTT法检测ARPE-19细胞的增殖率。Westernblot及免疫荧光法检测不同葡萄糖浓度下ARPE-19细胞ICAM-1与VEGF蛋白的表达。通过RT-PCR检测不同浓度葡萄糖作用下ARPE-19细胞ICAM-1及VEGFmRNA的表达。分别以不同浓度hUCMSCs外泌体(25μg/ml,50μg/ml,75μg/ml)处理损伤模型中的ARPE-19细胞,并设置对照组和高糖损伤组。通过应用Western blot和免疫荧光法以检测ARPE-19细胞ICAM-1和VEGF蛋白的表达,RT-PCR以检测RPE细胞ICAM-1和VEGF mRNA的表达。结果:1.电子显微镜下可以观察到hUCMSCs外泌体是囊腔中含有低电子密度的微小囊泡,直径在30-100nm大小,具有膜结构。且可检测到CD63和CD90的表达,表明外泌体来源于hUCMSCs。2.在不同葡萄糖浓度培养下,随着葡萄糖浓度的增加,ARPE-19的增值率逐渐降低,ICAM-1、VEGF蛋白及mRNA的表达增加。差异均有统计学意义(P<0.05)。而高渗组与对照组二者的表达与无明显差异。3.不同浓度hUCMSC外泌体作用下,ARPE-19细胞表达,ICAM-1及VEGF蛋白及mRNA均较高糖组有下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。且hUCMSC外泌体对两者的下调作用随hUCMSC外泌体浓度增加而增强。结论:1.应用低温梯度超速离心法能够从hUCMSCs上清液中成功提取出外泌体,且剂量稳定,通过鉴定表面特异性抗原,可证实外泌体来源于hUCMSCs。2.在35.0 mmol/L葡萄糖浓度组,细胞能够较高表达ICAM-1及VEGF,且凋亡率不高。因此本研究选取葡萄糖浓度为35.0mmol/L作为本实验细胞损伤模型。3.hUCMSCs外泌体能够有效降低高糖条件对ARPE-19细胞的损伤,下调高糖诱导作用下的ICAM-1及VEGF的表达,作用强度随hUCMSC外泌体浓度增强而增加。