猪腺垂体GH调控相关miRNAs的发掘及功能预测

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猪生长激素(porcine growth hormone,pGH)是由猪脑垂体前叶嗜酸性细胞分泌的一种单一肽链的蛋白质激素,具有广泛生理功能,主要作用是刺激骨、软骨细胞的生长和分化,调节蛋白质、糖及脂肪的代谢等。mciroRNA是近年来发现的重要的调控分子,参与了几乎所有的生命活动,但其在GH调控方面还没有报道。本研究拟对microRNA在GH调控中的作用进行初步分析。  通过激素处理(CST、GHRH、SS)原代培养的猪腺垂体细胞,经过miRNA表达谱芯片试验和代谢通路及miRNA生物信息学方法的预测,对可能参与到GH合成与分泌过程中的miRNA进行了初步的筛选。  首先,体外分离、培养猪腺垂体细胞,以分别100 nM CST,10 nM GHRH,100 nMSS处理细胞,检测细胞上清的GH含量及细胞内GH、Pit-1、GHRHR mRNA表达水平。结果表明,100 nM CST处理组显著抑制GH分泌而不影响GH、Pit-1、GHRHR mRNA表达水平;10 nM GHRH处理组极显著促进GH分泌并显著性地提高了GH、Pit-1、GHRHR mRNA表达水平;100 nM SS处理组极显著促进GH分泌,GHRHR mRNA表达水平不受影响,GH、Pit-1 mRNA表达水平得到显著提高。提示CST处理不影响腺垂体GH细胞GH合成,可能抑制GH分泌,GHRH可以通过促进GHRHR合成增强GHRH的作用效果,同时可以通过促进Pit-1的合成介导GH合成与分泌,SS可以通过促进Pit-1的合成介导GH合成与分泌;  其次,通过miRNA表达谱芯片分析得到44个差异表达miRNAs,其中在CST处理组中18个miRNA表达上调,13个miRNA表达下调,在GHRH处理组中10个miRNA表达上调,13个miRNA表达下调,在SS处理组中19个miRNA表达上调,9个miRNA表达下调,推测他们可能分别做为GH合成分泌的抑制基因和激动基因;代谢通路分析发现44个差异表达miRNAs可能参与调节MAPK信号通路、钙离子信号通路、Wnt信号通路Notch信号通路。  第三,通过靶基因软件预测发现ssc-let-7c(GHRHR)、ssc-let-7i(GHRHR)、ssc-miR-34a(Lef-1)、ssc-miR-136(SSTR2)、ssc-miR-326(SSTR2/Lef-1)、ssc-miR-185(POU1F1)、ssc-miR-214(GH1)、ssc-miR-26a(Lef-1)可能分别通过靶向相关基因参与GH合成分泌过程。  综上所述,本研究初步分析了在不同激素处理猪腺垂体细胞中发生变化的miRNA,通过生物信息学的方法,miRNA可能分别通过靶向相关基因参与GH合成分泌过程。
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