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本文对基因工程菌毕赤酵母GS115表达重组人复合α干扰素进行了研究,主要解决了两方面的问题,一是毕赤酵母表达复合α干扰素的工艺优化,二是对发酵中存在的目的蛋白的聚合与降解现象进行分析与研究,并对聚合与降解问题进行解决。
在5L罐上对毕赤酵母表达α干扰素的诱导pH、甘油补料时间的确定,甲醇补料进行优化,确定诱导pH为5.0,甘油补料时间为4小时,甲醇补加以发酵液中甲醇残留为依据,使目的蛋白的表达提高到686mg/L。
对毕赤酵母表达α干扰素聚合与降解现象进行研究,发现聚合体以二聚体、三聚体等多聚体的形式存在,降解在14kD以上有3-6条降解条带14kD以下有多条降解条带直到完全降解。聚合体有非共价键与共价键的结合,共价键为二硫键的结合。研究发现降低诱导时的温度及添加表面活性剂Tween-20可以有效地降低目的蛋白的聚合与降解现象。采用优化后的发酵条件,在诱导期采用20℃的发酵温度并加入表面活性剂Tween-20,使cIFN单体达到1.21g/L,生物活性达到9.46×108IU/ml,生物活性比初始活性提高了17.6倍。