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乳腺癌是威胁女性健康最为常见的恶性肿瘤。据2018年美国癌症中心数据报告显示，乳腺癌已占女性新发恶性肿瘤的30%。我国国家癌症中心的最新统计数据也表明，中国乳腺癌发病率呈上升趋势，目前是中国女性发病率最高的恶性肿瘤。2015年乳腺癌新发病例预计为27万例，死亡人数逾7万例。雌激素受体（Estrogen receptor,ER）、孕激素受体（Progesterone receptor,PR）和人类表皮生长因子受体-2（Human epidermal growth factor receptor2,HER-2）均为阴性的三阴性乳腺癌（Triple negative breast cancer,TNBC）是乳腺癌的特殊一型，约占乳腺癌的10~20%。TNBC的生物学行为及临床病理特征与其他类型乳腺癌不同，其恶性程度高、侵袭性强，容易发生肺、脑、骨等部位的转移。TNBC对内分泌和HER-2抗体治疗不敏感，且缺乏针对性的分子靶向药物，预后极差。新辅助治疗虽有一定疗效，但细胞毒性药物的选择性差、毒性大，易发生耐药而致肿瘤复发和转移。迄今尚无针对晚期TNBC的有效治疗方法，深入研究转移相关信号通路和化疗抵抗机制，发现新的作用靶点，从而破解晚期TNBC无药可治的困局，是提高患者生存质量、降低死亡率的关键。文章分为以下几个部分: 第一部分Rad51对TNBC细胞侵袭、迁移及化疗敏感性的影响 目的： 探究Rad51基因对人三阴性乳腺癌细胞迁移、侵袭及化疗敏感性的影响。 方法： 1）人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231转染Rad51siRNA后，采用Western blot法检测Rad51蛋白水平的变化。并采用划痕实验及Transwell法检测转染Rad51siRNA后，MDA-MB-231细胞迁移、侵袭能力的改变。2）CCK-8法检测Rad51siRNA单用及与化疗药物联用对四种三阴性乳腺癌细胞株的毒性作用。3）应用人三阴性乳腺癌MDA-MB-231/Luc-GFP细胞，构建裸小鼠乳腺癌肺转移模型。应用以纳米多孔硅微粒为基础的多级载药系统（Multistage vectorsdelivery system,MSV）携载Rad51siRNA（MSV/Rad51），静脉给予MSV/Rad51或联合阿霉素，通过小动物活体成像系统观察Rad51抑制对乳腺癌细胞肺转移的影响。 结果： 1）与阴性对照Scr siRNA相比，Rad51siRNA可显著抑制MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移。2）Rad51基因沉默后，人TNBC细胞对化疗药物的敏感性显著增强：MDA-MB-231细胞对Dox的敏感性显著提高，MDA-MB-468细胞对Dox敏感性显著提高，SUM159细胞对Dox和Cis显著增敏，SK-BR-3细胞对Cis显著增敏。3）在乳腺癌肺转移小鼠模型中，MSV/Rad51与化疗药物阿霉素联用，使MDA-MB-231的肺转移显著受抑。 结论： Rad51siRNA通过有效抑制人三阴性乳腺癌细胞中Rad51蛋白的表达，可显著降低三阴性乳腺癌细胞的侵袭和迁移能力，并提高细胞对化疗药物的敏感性。成功应用以纳米多孔硅微粒为基础的多级载药系统携载Rad51siRNA，MSV/Rad51与阿霉素联用可显著抑制乳腺癌细胞肺转移。 第二部分:Rad51影响TNBC转移的机制研究 目的： 研究Rad51基因影响三阴性乳腺癌细胞迁移、侵袭的机制。 方法： 1）于MDA-MB-231细胞分别转染Rad51siRNA和Scr siRNA后，采用基因表达谱芯片技术，筛选出与侵袭迁移相关的差异表达基因，进行后续研究。2）应用PCR和Western blot法验证Rad51对SEMA3G的调控作用。3）采用免疫组化方法检测90例三阴性乳腺癌患者肿瘤组织中SEMA3G的表达情况，并分析SEMA3G与三阴性乳腺癌患者临床病理特征的关系。4）Transwell小室法检测SEMA3G对MDA-MB-231细胞迁移、侵袭能力的影响。5)划痕及Transwell法检测Rad51siRNA与SEMA3G siRNA联用，对TNBC细胞侵袭、迁移能力的影响。6)将MDA-MB-231细胞经Rad51siRNA和Rad51siRNA+Dox处理后，采用Western blot法检测N-cadherin、β-cadheri、AKT和phospho-AKT蛋白表达的变化。 结果： 1）MDA-MB-231细胞中沉默Rad51基因后，基因表达谱芯片共筛选出差异基因2015个，其中1135个基因上调，880个基因下调。与侵袭迁移相关的SEMA3G基因差异倍数最大，作为后续研究。2）Rad51沉默后，SEMA3G mRNA 和蛋白表达水平上调。3）SEMA3G在三阴性乳腺癌组织胞浆和胞核中均有不同程度的表达，且胞浆表达与TNM分期显著正相关，胞核表达和病理分级、TNM临床分期显著正相关，而与其他因素无关。4）与阴性对照Scr siRNA组相比，SEMA3G siRNA可显著促进MDA-MB-231侵袭和迁移。5）SEMA3G siRNA可显著降低Rad51siRNA对MDA-MB-231侵袭和迁移能力的抑制作用。6）Rad51siRNA可显著下调N-cadherin和β-catenin，与Dox联用后，下调作用更为显著。而Rad51siRNA及Rad51siRNA与阿霉素联用后，phospho-AKT蛋白表达无明显差异。 结论： Rad51可负调控SEMA3G mRNA和蛋白表达水平，且SEMA3G在TNBC患者肿瘤组织的胞浆和胞核中均有不同程度的表达。MDA-MB-231细胞沉默SEMA3G后，细胞侵袭、迁移能力显著增强。SEMA3G siRNA可阻碍Rad51siRNA对三阴性乳腺癌细胞转移的抑制作用，提示SEMA3G可能参与Rad51对三阴性乳腺癌细胞转移的作用。Rad51可通过调控N-cadherin影响EMT促进TNBC侵袭迁移，也可通过调控β-catenin控通过，参与TNBC转移及化疗抵抗。