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目的：
温阳中药对肾阳虚证及雷公藤多苷(Multi-glycoside of Tripterygium wilfordii Hook.f.,TW)诱发小鼠生殖功能减退为主的肾阳虚证的作用、机理研究。
方法：
本课题分为临床研究和实验研究。临床研究:选择符合中医“肾阳虚证”的慢性肾脏疾病患者62例,分对照组和治疗组每组31例。治疗组给予温阳益气方,对照组给予金匮肾气片,各组连续治疗8周,观察两组肾阳虚证给药前后证侯积分变化。实验研究:采用体重(30±5)g昆明雄鼠,体重(25±3)g昆明雌鼠。将雄鼠随机分为空白Ⅰ组、空白Ⅱ组以1％CMC 0.5 ml/只/d灌胃;雷公藤Ⅰ组、雷公藤Ⅱ组、治疗组、停药组均以TW混悬液30 mg/(kg·d)灌胃;预防Ⅰ组、预防Ⅱ组以TW混悬液30 mg/(kg·d)+肉苁蓉煎液10 g/(kg·d)灌胃。每组10只,灌胃20 d后与雌鼠以1:2比例合笼7 d后分笼,处死空白Ⅰ组、雷公藤Ⅰ组、预防Ⅰ组。剩余雄鼠继续灌胃20 d,其中治疗组改为TW混悬液30 mg/(kg·d)+肉苁蓉煎液10 g/(kg·d),停药组改为1％CMC溶液。第48 d与雌鼠以1:2比例合笼7 d后笼。每周观察雄鼠的体重变化;第20d、48d观察虚证表现率;第48天雄鼠收集24 h尿液,ELISA法检测尿17-OHCS;第28 d和第55 d处死雄鼠后测睾丸脏器指数;精子畸形率;放免法检测血清FSH、LH、T含量;HE染色观察睾丸、附睾组织病理变化及免疫组化法检测睾丸组织中Bax和Bcl-2的表达;制备睾丸表达谱基因芯片,观察生殖相关基因的表达;分笼两周后统计雌鼠怀孕率。
结果：
临床研究:治疗前后肾阳虚证证侯积分经统计发现,治疗组总有效率72.41％,对照组为74.19％(P＞0.05),两组总体疗效无显著差异,但是对于其中的症状改善却有偏重。
实验研究:体重:雷公藤Ⅱ组在第54 d时体重降低明显,较空白Ⅱ组有统计学差异,(P＜0.05)。预防Ⅱ组、空白Ⅱ组体重基本一致。虚证表现率:雷公藤Ⅱ组的虚证表现率最高,空白Ⅱ组最低。怀孕率:给药20 d后,各组雌鼠怀孕率下降趋势明显。给药40 d后,雷公藤Ⅱ组、预防Ⅱ组、治疗组、停药组怀孕率较正常Ⅱ组低(p＜0.05)。雷公藤Ⅱ组较预防和停药组都降低(p＜0.05)。睾丸脏器指数和精子畸形率:雷公藤Ⅰ、Ⅱ组较其他组损伤明显(P＜0.05)。血浆激素含量结果示:TW给药20 d血浆T含量较空白组降低,(P＜0.05);停药20 d后仍未恢复正常,(P＜0.05);预防Ⅰ组T含量低于空白Ⅰ组,P＜0.05;预防Ⅱ组T含量明显增高,与空白组无差异。TW给药20 d和40 d,FSH、LH变化都不明显,而TW停药20 d后FSH明显上升,(P＜0.05)。尿17-OHCS:TW给药40 d,尿17-OHCS含量轻度升高,停药组未升高。肉苁蓉干预40 d后,尿17-OHCS含量显著升高,(P＜0.05)。组织病理:雷公藤Ⅰ、Ⅱ组生精小管内各级精母细胞、精子细胞和成熟精子减少;附睾管上皮退变、腔内精子减少。停TW后,病理损伤未加重。预防组病理变化最轻。Bcl-2/Bax表达:TW给药40 d可以刺激小鼠睾丸组织中的Bax蛋白表达,(P＜0.05)。预防Ⅱ组表达不明显,(P＜0.05)。Bcl-2无明显变化,(P＜0.05)。表达谱基因芯片示:雷公藤Ⅱ组有1932条基因表达出现异常,与生殖相关基因354条。其中有已经公认的与生殖密切相关的基因Herc4、Ip011和Mrt04的表达异常。
结论：
温阳益气方可以明显改善肾阳虚病人的阳虚症状,疗效显著。TW可以通过下丘脑-垂体-性腺轴影响激素分泌,使睾丸、附睾、精子的形态学改变,细胞凋亡基因相关蛋白及生殖相关基因的异常表达诱发雄性小鼠生殖功能减退。且这一变化符合中医肾阳虚证的病变。TW的这一作用呈时间依赖和剂量依赖。停药后有自愈倾向。温阳中药肉苁蓉可以从下丘脑-垂体-性腺轴,睾丸、附睾、精子的形态学,细胞凋亡的角度一定程度上缓解TW对生殖功能的影响。