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目的:观察平喘方及其拆方对支气管哮喘模型小鼠转录因子T-bet、GATA-3和IFN-γ(干扰素-γ)、IL-4(白介素-4)表达的影响,探讨平喘方及其拆方对哮喘的防治作用,为中医药创新和推广提供实验资料。
方法：通过对BALB/c小鼠用卵蛋白等腹腔注射致敏、雾化吸入激发,建立支气管哮喘动物模型。在中医药原则的指导下,将120只清洁级雄性BALB/c小鼠,随机分为6组:空白对照组、哮喘模型组、平喘方组、平喘方拆方1组、平喘方拆方2组、平喘方拆方3组。各组分别于雾化激发哮喘后7天、21天分两批处死、取样、检测,动态观察。采用RT-PCR(Real Time PCR)法检测小鼠肺组织T-bet、GATA-3 mRNA的表达;酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测小鼠肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IFN-γ的水平;观察小鼠肺组织病理学改变。
结果：
1.哮喘激发7天:
各组与空白组比较:
模型组T-bet和IFN-γ明显降低(P＜0.05,P＜0.01),GATA-3和IL-4明显升高(P＜0.05,P＜0.01);T-bet/GATA-3比值和IFN-γ/IL-4比值均明显降低(P＜0.05,P＜0.01);平喘方组IFN-γ降低(P＜0.01),IL-4升高(P＜0.01);IFN-γ/IL-4比值降低(P＜0.01);拆方1、2、3组GATA-3、IL-4升高(P＜0.01或.P＜0.05)及(P＜0.01);T-bet/GATA-3比值、IFN-γ及IFN-γ/IL-4比值降低(P＜0.05,P＜0.01)。
各组与模型组比较:
平喘方组IFN-γ明显升高(P＜0.01),GATA-3和IL-4明显降低(P＜0.05,P＜0.01),IFN-γ/IL-4比值明显升高(P＜0.01);拆方1、2、3组T-bet和IFN-γ组明显升高(P＜0.05,P＜0.01),IL-4明显降低(P＜0.01);IFN-γ/IL-4比值明显升高(P＜0.01);拆方2、3组GATA-3明显降低(P＜0.05);拆方3组T-bet/GATA-3比值升高(P＜0.05)。
组间比较,平喘方组与拆方1、2、3组相比IFN-γ升高(P＜0.01),IL-4降低(P＜0.01),IFN-γ/IL-4比值升高(P＜0.01)。拆方3组和拆方1、2组相比IL-4升高(P＜0.05)。拆方1组GATA-3较平喘方及拆方2、3组升高(P＜0.05或P＜0.01)。拆方3组T-bet/GATA-3比值较拆方1组升高(P＜0.05)。
2.哮喘激发21天:
各组与空白组比较:
模型组T-bet、IFN-γ明显降低(P＜0.01),GATA-3、IL-4明显升高(P＜0.01),T-bet/GATA-3比值和IFN-γ/IL-4比值明显降低(P＜0.01)。平喘方组及拆方1、2、3组T-bet、IFN-γ降低(P＜0.01),IL-4升高(P＜0.01);IFN-γ/IL-4比值降低(P＜0.01)。平喘方组GATA-3略为降低(P＜0.05);拆方1、2、3组T-bet/GATA-3比值降低(P＜0.05或P＜0.01),平喘方组T-bet/GATA-3比值无显著差异。
各组与模型组比较:
平喘方组及拆方1、2、3组T-bet、IFN-γ升高(P＜0.01),GATA-3、IL-4降低(P＜0.01),T-bet/GATA-3、IFN-γ/IL-4比值升高(P＜0.01)。
组间比较,平喘方组与拆方1、2、3组相比IFN-γ、IFN-γ/IL_4比值升高(P＜0.01),IL-4降低(P＜0.01)。拆方1组T-bet低于平喘方组、拆方3组(P＜0.05),GATA-3与平喘方组、拆方2、3组相比升高(P＜0.05),T-bet/GATA-3比值低于平喘方、拆方2、3组(P＜0.05或P＜0.01)。拆方2组T-bet低于拆方3组(P＜0.05)。拆方3和拆方1组相比IL-4升高(P＜0.05)。
3.激发7天、21天,T-bet/GATA-3 mRNA与IFN-γ/IL-4两对比值的调节作用具有一定正相关性,r=0.584(P＜0.01)及r=0.683(P＜0.01)。
4.哮喘激发7天、21天,小鼠肺组织病理显示模型组细支气管粘膜上皮损伤脱落,管腔内炎性渗出物充塞,管壁及管周炎性细胞浸润。平喘方及其拆方各组细支气管管壁结构完整,管周少量炎性细胞浸润。
结论：
1.哮喘模型小鼠经卵蛋白腹腔注射,并以卵蛋白雾化吸入激发后,可使T-bet、IFN-γ明显降低,GATA-3、IL-4明显升高,T-bet/GATA-3及IFN-γ/IL-4表达失衡。
2.平喘方及其拆方各组均能不同程度地调节支气管哮喘小鼠th1/Th2上游因子T-bet/GATA-3 mRNA的表达,对Th1/Th2细胞的失衡有纠正作用。
3.平喘方组及其拆方各组均能上调支气管哮喘小鼠IFN-γ水平,下调IL-4水平,改变IFN-γ/IL-4比值,纠正体内Th1/Th2细胞失衡。
4.对T-bet/GATA-3 mRNA的调节,激发7天拆方3较好,对于Th1/Th2失衡具有双向纠偏的作用,平喘方主要表现在降低GATA-3为主。激发21天平喘方较好,对于Th1/Th2失衡具有双向纠偏的作用。对IFN-γ/IL-4的调节平喘方组作用较好。对减轻哮喘发病症状,改善哮喘气道炎症全方较好,拆方3疗效接近原方。