头颈鳞癌HPV检测及预后分析

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【背景】  头颈鳞癌(head and neck squamous cell carcinoma, HNSCC)的发生和吸烟、饮酒及病毒感染等多种因素有关。人乳头状瘤病毒(human papilloma virus, HPV)感染与头颈鳞癌,特别是口咽鳞癌的发生密切相关。HPV(+)HNSCC的流行病学数据存在明显的地区差异,且大部分研究来自西方国家。目前尚无本地区HPV(+)HNSCC流行病学数据,HPV在HNSCC的发生发展中的意义尚不清楚。  【目的】  1. 研究本院HNSCC原发病灶中HPV状态并对其进行亚型分析。探索本地区HNSCC的主要致病因素。  2. 评价癌组织中HPV状态、p16表达、p53表达的关系,探索其理论机制。  3. 探索本地区头颈鳞癌患者预后的独立影响因素。  【方法】  1. 实验研究:收集符合入组标准的167例HNSCC患者用福尔马林固定石蜡包埋的肿瘤原发灶标本;免疫组化法测定其p16、p53蛋白的表达;原位杂交法( In situ hybridization,ISH)测定肿瘤组织中是否存在HPV 16/18 DNA; RNAscope法测定p16阳性细胞数≥50%的19例肿瘤组织中HPV HR 18的表达。全部实验研究均设计阳性和阴性对照,至少重复实验2次。  2. 临床研究:收集患者的临床资料,记录性别、年龄、吸烟酗酒史、居住地、原发灶部位、肿瘤分期、病理分级及治疗方案;对患者进行随访,记录生存状况。  3. 统计学方法:应用非参数Spearman等级相关分析或卡方检验评价p16、p53蛋白表达及与各项临床参数的相关性。生存分析采用Kaplan-Meier法,Log-rank检验;采用 COX回归模型分析影响患者生存的独立影响因素;P值<0.05认为有统计学差异。  【结果】  1. p16蛋白表达率为13.8%(23/167),其中强表达率(肿瘤细胞阳性率≥75%为强阳性)为7.2%(12/167),p53蛋白的表达率为61.1%(102/167)。  2. ISH检测全部167例HNSCC原发灶均未发现HPV 16/18 DNA,重复实验结果一致;RNAscope方法测定p16阳性细胞数≥50%的19例肿瘤组织中HPV HR 18的表达,结果3例阳性。  3. 本组中65.9%(110/167)的患者有烟酒嗜好。  4. p16蛋白表达及强表达均与年龄及原发灶部位存在显著性相关(P<0.05)。p53蛋白表达与肿瘤分期存在显著性相关(P<0.05)。  5. 167例患者中7例失访(4.1%)。中位随访29.8个月(13.6-124.8个月)。全组1, 2,3年生存率分别为90.2%、76.3%、69.4%。单因素分析显示:无烟酒嗜好及肿瘤早期患者的预后优于有烟酒嗜好及肿瘤晚期患者。多因素分析结果显示肿瘤分期是影响患者生存状况的独立影响因素(P=0.018)。  【结论】  1. 烟酒嗜好是本地区HNSCC主要致病因素;HPV是口咽癌可能的致病因素之一。  2. 以p16≥75%为判断HNSCC存在HPV的依据,本院HNSCC原发灶中HPV的阳性率较低(7.2%,12/167),其中以口咽癌患者的阳性率最高(29.4%,5/17),且呈年轻化趋势。  3. 本院HPV(+)HNSCC主要致病病毒亚型并非HPV 16/18,而是包括HPV HR 18的其它致病HPV亚型;  4. 无烟酒嗜好及肿瘤早期患者的预后优于有烟酒嗜好及肿瘤晚期患者。基于本研究病例的预后分析显示HPV(+)并非影响预后的独立因素,影响预后的独立因素为肿瘤分期。
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