【摘 要】
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宫颈癌是严重威胁妇女健康的疾病,其死亡率占妇女恶性肿瘤的第二位.流行病学调查表明,90%宫颈癌组织中都存在一个以上型别的HPV,其中以HPV16为主,故研制HPV16预防性疫苗,对预
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宫颈癌是严重威胁妇女健康的疾病,其死亡率占妇女恶性肿瘤的第二位.流行病学调查表明,90%宫颈癌组织中都存在一个以上型别的HPV,其中以HPV16为主,故研制HPV16预防性疫苗,对预防宫颈癌的发生及发展意义重大.研究表明,HPV16L1晚期基因所编码的蛋白能刺激机体产生保护性抗体,抵御HPV的攻击,并且在真核表达系统表达出的L1蛋白能自我组装成VLPs,该VLPs具有与天然病毒相似的结构和抗原性,在疫苗研制方面具有广阔应用前景.该研究利用基因工程手段,以HPC16L1为目的基因,经与表达载体pPIC3.5相连,构建了HPV16L10-pPIC3.5重组质粒,并用该重组质粒对甲醇营养型酵母菌GS115进行了转化.根据转化前后宿主菌表型的不同,利用RDB平板、MD平板和MM平板对阳性重组菌株作了初步筛选,并将阳性转化株在甲醇营养型酵母表达系统内经甲醇诱导表达了HPV16L1蛋白.经SDS-PAGE证实,所表达的蛋白分子量约为55KD,这与预计相同;并通过Western blot证实该蛋白能与鼠抗HPV16L1单克隆抗体相结合出现一条特异反应区带,从而进一步证实所表达的蛋白确为HPV16L1基因编码的主要衣壳蛋白.电镜下可见所表达的蛋白自我组装成的VLPs颗粒,其大小、形态与天然病毒颗粒相似的.
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