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背景与目的：
疟疾对全球公共卫生健康危害巨大，特别在非洲撒哈拉沙漠以南地区，由于经济落后和特殊地理位置，疟疾疫情非常严峻。耐药性疟原虫更是给疟疾流行国家与地区卫生健康事业构成严重威胁。目前，世界卫生组织推荐以青蒿素为基础的联合疗法作为治疗疟疾的一线药物。抗疟药物治疗效果的评估和耐药性相关基因突变流行情况的调查，对疟疾药物治疗策略的制定至关重要。本次研究的主要目的：①对非洲赤道几内亚地区进行恶性疟原虫青蒿素耐药性相关K13基因（PlasmodiumfalciparumKelch13gene,PFK13）单核苷酸多态性研究，分析该地区在长期使用以青蒿素为基础的联合用药下，恶性疟原虫的进化选择效应；②对与哌喹敏感性密切相关的恶性疟原虫多耐药基因1（Plasmodiumfalciparummultidrugresistancegene1，PFMDR1）进行基因多态性分析，结合PFK13基因研究情况，评价恶性疟原虫对双氢青蒿素-哌喹的联合疗法治疗耐药状况，为该地区抗疟药物选择策略制定提供依据。
材料与方法：
本研究所用材料主要有两部分：①随机抽取2011年至2018年间赤道几内亚地区的确诊单纯恶性疟原虫感染的病人血样共2,000例，患者于就诊当天抽血检测，使用免疫层析诊断试验对进行疟疾实验室筛查，并通过血液涂片的显微镜检查予以确认；②从2014年1月至2017年12月，登记赤道几内亚地区参与双氢青蒿素-哌喹治疗后的有效性和耐药性相关基因突变研究的单纯性恶性疟原虫感染患者371例，患者常规剂量治疗第3天回访，查血检恶性疟原虫清除情况。
使用高分辨熔解曲线分析方法，对2,000例恶性疟原虫感染患者进行青蒿素耐药性相关PFK13基因突变进行筛查。对371例患者进行恶性疟原虫青蒿素耐药相关PFK13基因和多重耐药基因MDR1基因进行扩增和测序，使用BioEdit软件进行序列比对分析，运用DnaSP软件进行基因单核苷酸多态性分析，治疗3天回访恶性疟原虫阳性患者和阴性患者基因突变位点比较采用卡方检验，计算OR值，评价耐药性的危险因素。统计分析使用SPSS17.0版本完成，P<0.05为差异具有统计学意义。
结果：
1.被调查的非洲赤道几内亚地区2011年至2018年2,000例感染恶性疟原虫的患者样本中，尚未发现恶性疟原虫青蒿素抗性相关PFK13基因突变位点。
2.371例参与抗疟药物治疗3天（D3）回访检测的患者中，有24例是复检血样显微镜下恶性疟原虫阳性，占6.47%(24/371)。成功扩增PFK13基因和多重耐药基因MDR1基因并测序的样本有65例。
3.通过对PFK13基因序列比对分析发现5个非同义突变(H136N，CAT>AAT；K189N，AAG>AAC；K248N，AAG>AAT；K326E，AAA>GAA以及K332N，AAA>AAC)，D3阳性组和D3阴性组非同义突变的频率无统计学差异(P>0.05)，与恶性疟原虫青蒿素抗性无关。
4.对PFK13基因的单核苷酸多态性做进化选择分析。样本的全基因核苷酸平均差异度K值为0.763。核苷酸差异最大的是在疟原虫特异性区(1-440位密码子)(K=0.732)，而最低的是在螺旋桨区(密码子441-726)(K=0.030)。TajimasD检验结果为-1.590(P=0.1>0.05)无统计学意义。FuandLisD和F值分别为-3.546(P<0.02)和-3.415(P<0.02)。核苷酸多样性(π)在这个基因为0.00039，处于较低水平。
5.对MDR1基因进行序列分析，发现了与ACTs联合治疗的搭配药物哌喹抵抗相关的突变位点：N86Y和Y184F。38.50%(25/65)携带N86Y(AAC>TAT)突变；73.80%(48/65)的Y184F(TAT>TTT)突变。其中N86Y突变在D3阳性组和D3阴性组中差异具有统计学意义（P=0.038）。
结论：
1.此次调查未发现世界卫生组织已经确认的恶性疟原虫青蒿素耐药相关PFK13基因突变位点。
2.赤道几内亚地区的恶性疟原虫青蒿素耐药相关PFK13基因螺旋桨结构域发生突变的频率较低。
3.在青蒿素及其衍生物治疗下，该区域疟原虫耐药性进化选择效应是不确定的。应该继续对该地区进行观察。
4.赤道几内亚地区存在PFMDR1基因N86Y突变位点，可能与该地区使用哌喹药物治疗而出现的耐药现象有关。
5.PFK13基因可能不是赤道几内亚地区抗疟药物耐药性的最佳预测分子标记，应定期对青蒿素及其衍生物和其联合使用的药物耐药性进行检测。
疟疾对全球公共卫生健康危害巨大，特别在非洲撒哈拉沙漠以南地区，由于经济落后和特殊地理位置，疟疾疫情非常严峻。耐药性疟原虫更是给疟疾流行国家与地区卫生健康事业构成严重威胁。目前，世界卫生组织推荐以青蒿素为基础的联合疗法作为治疗疟疾的一线药物。抗疟药物治疗效果的评估和耐药性相关基因突变流行情况的调查，对疟疾药物治疗策略的制定至关重要。本次研究的主要目的：①对非洲赤道几内亚地区进行恶性疟原虫青蒿素耐药性相关K13基因（PlasmodiumfalciparumKelch13gene,PFK13）单核苷酸多态性研究，分析该地区在长期使用以青蒿素为基础的联合用药下，恶性疟原虫的进化选择效应；②对与哌喹敏感性密切相关的恶性疟原虫多耐药基因1（Plasmodiumfalciparummultidrugresistancegene1，PFMDR1）进行基因多态性分析，结合PFK13基因研究情况，评价恶性疟原虫对双氢青蒿素-哌喹的联合疗法治疗耐药状况，为该地区抗疟药物选择策略制定提供依据。
材料与方法：
本研究所用材料主要有两部分：①随机抽取2011年至2018年间赤道几内亚地区的确诊单纯恶性疟原虫感染的病人血样共2,000例，患者于就诊当天抽血检测，使用免疫层析诊断试验对进行疟疾实验室筛查，并通过血液涂片的显微镜检查予以确认；②从2014年1月至2017年12月，登记赤道几内亚地区参与双氢青蒿素-哌喹治疗后的有效性和耐药性相关基因突变研究的单纯性恶性疟原虫感染患者371例，患者常规剂量治疗第3天回访，查血检恶性疟原虫清除情况。
使用高分辨熔解曲线分析方法，对2,000例恶性疟原虫感染患者进行青蒿素耐药性相关PFK13基因突变进行筛查。对371例患者进行恶性疟原虫青蒿素耐药相关PFK13基因和多重耐药基因MDR1基因进行扩增和测序，使用BioEdit软件进行序列比对分析，运用DnaSP软件进行基因单核苷酸多态性分析，治疗3天回访恶性疟原虫阳性患者和阴性患者基因突变位点比较采用卡方检验，计算OR值，评价耐药性的危险因素。统计分析使用SPSS17.0版本完成，P<0.05为差异具有统计学意义。
结果：
1.被调查的非洲赤道几内亚地区2011年至2018年2,000例感染恶性疟原虫的患者样本中，尚未发现恶性疟原虫青蒿素抗性相关PFK13基因突变位点。
2.371例参与抗疟药物治疗3天（D3）回访检测的患者中，有24例是复检血样显微镜下恶性疟原虫阳性，占6.47%(24/371)。成功扩增PFK13基因和多重耐药基因MDR1基因并测序的样本有65例。
3.通过对PFK13基因序列比对分析发现5个非同义突变(H136N，CAT>AAT；K189N，AAG>AAC；K248N，AAG>AAT；K326E，AAA>GAA以及K332N，AAA>AAC)，D3阳性组和D3阴性组非同义突变的频率无统计学差异(P>0.05)，与恶性疟原虫青蒿素抗性无关。
4.对PFK13基因的单核苷酸多态性做进化选择分析。样本的全基因核苷酸平均差异度K值为0.763。核苷酸差异最大的是在疟原虫特异性区(1-440位密码子)(K=0.732)，而最低的是在螺旋桨区(密码子441-726)(K=0.030)。TajimasD检验结果为-1.590(P=0.1>0.05)无统计学意义。FuandLisD和F值分别为-3.546(P<0.02)和-3.415(P<0.02)。核苷酸多样性(π)在这个基因为0.00039，处于较低水平。
5.对MDR1基因进行序列分析，发现了与ACTs联合治疗的搭配药物哌喹抵抗相关的突变位点：N86Y和Y184F。38.50%(25/65)携带N86Y(AAC>TAT)突变；73.80%(48/65)的Y184F(TAT>TTT)突变。其中N86Y突变在D3阳性组和D3阴性组中差异具有统计学意义（P=0.038）。
结论：
1.此次调查未发现世界卫生组织已经确认的恶性疟原虫青蒿素耐药相关PFK13基因突变位点。
2.赤道几内亚地区的恶性疟原虫青蒿素耐药相关PFK13基因螺旋桨结构域发生突变的频率较低。
3.在青蒿素及其衍生物治疗下，该区域疟原虫耐药性进化选择效应是不确定的。应该继续对该地区进行观察。
4.赤道几内亚地区存在PFMDR1基因N86Y突变位点，可能与该地区使用哌喹药物治疗而出现的耐药现象有关。
5.PFK13基因可能不是赤道几内亚地区抗疟药物耐药性的最佳预测分子标记，应定期对青蒿素及其衍生物和其联合使用的药物耐药性进行检测。