米曲霉植酸酶的分离纯化、性质研究及其基因的克隆

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植酸及其盐类广泛存在于自然界的各种植物组织和粮食产品中,是磷和肌醇的主要存储形式,同时对保持机体磷的平衡起重要作用。植酸酶作为一种单胃动物的饲料添加剂,可以提高植物饲料中磷的利用率,减少磷排泄对环境的污染,同时还能降低植酸的抗营养作用。 本文通过对米曲霉进行发酵,优化其产植酸酶的条件,提高植酸酶的产量,以期望可以直接用于生产。通过分离、纯化,得到电泳纯的米曲霉植酸酶组分。对该组分进行分析,确定该酶的分子量及热稳定性等理化性质。并通过化学修饰的方法,对该酶的活性中心进行分析,通过实验,确定了该酶的活性中心包括精氨酸、组氨酸等,从氨基酸的角度证明该酶属于phyA类植酸酶。 为建立基因和蛋白质之间的联系,本文采用PCR方法从米曲霉染色体DNA中扩增得到植酸酶基因(phyA),克隆至载体pMD18-T上,构建了重组质粒pMD18-T-phyA。对pMD18-T-phyA上插入的植酸酶基因外源片段进行了测序和序列分析。测序结果表明:米曲霉植酸酶结构基因由1400个核苷酸残基组成,编码466个氨基酸,与报道基本相同。将该序列提交NCBI GeneBank,获得Accession Number为DQ464124。对植酸酶进行同源构建,米曲霉植酸酶属于组氨酸酸性磷酸酶家族
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