【摘 要】
：
鸡白介素6(ChIL-6)既参与疾病发生过程,又可作为免疫佐剂在免疫治疗方面起重要作用,是一种多功能的细胞因子,是当前免疫学研究的热点。ChIL-6的检测通常使用免疫学、生物学活
论文部分内容阅读
鸡白介素6(ChIL-6)既参与疾病发生过程,又可作为免疫佐剂在免疫治疗方面起重要作用,是一种多功能的细胞因子,是当前免疫学研究的热点。ChIL-6的检测通常使用免疫学、生物学活性测定和分子生物学等方法。生物学检测法较敏感,可以直接测定ChIL-6的生物学功能,但是该方法需要培养依赖ChIL-6生长的细胞株,检测耗时长、步骤复杂。ELISA方法可用于检测ChIL-6,但是需要有针对ChIL-6不同抗原表位的抗体。因此,建立一种具有自主产权的方便、快速、实用的检测ChIL-6的方法是目前我们急需解决的问题之一。本研究利用原核表达ChIL-6,获得了可溶性的ChIL-6,研制并获得了针对ChIL-6的单克隆抗体,为建立ChIL-6的快速检测方法奠定基础。通过PCR扩增570bp鸡IL-6成熟肽基因,克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建pET-ChIL-6重组质粒,转化大肠杆菌Rosetta中进行诱导表达。SDS-PAGE结果显示,重组鸡白细胞介素-6(rChIL-6)蛋白大小为40kDa左右；可溶性分析表明,rChIL-6蛋白大部分存在于裂解液上清中；生物学活性测定显示,10ng/mL rChIL-6即能有效地促进IL-6依赖性细胞系7TD1细胞的增殖能力；用pcDNA-IL-6质粒免疫小鼠所得的血清为一抗进行Western blot,结果证明rChIL-6具有良好的抗原特异性。先以pcDNA-IL-6重组质粒为免疫原肌肉注射免疫8周龄的Balb/c雌鼠,100μg/只,每2周免疫1次,4免后用rChIL-6蛋白加强免疫一次,取脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0融合。以rChIL-6纯化蛋白作为筛选的抗原,HIS蛋白为阴性对照,用ELISA方法对杂交瘤细胞进行筛选,选择ChIL-6反应呈阳性、HIS蛋白反应呈阴性的孔进行亚克隆,共获得3株针对鸡IL-6的特异性单克隆抗体,分别为1B8、4G8和6C12,腹水的间接ELISA效价分别为：1：64000、1：256000和1：256000；亚类鉴定结果显示,4G8为1gG亚类,1B8和6C12单抗均为IgM亚类；3株单克隆抗体均能与pcDNA-IL-6转染的COS-1细胞反应产生特异性绿色荧光。VWestern blot结果显示3株单克隆抗体均与rChIL-6和rChIL6-1蛋白反应,不与rChIL6-2和HIS蛋白反应。6C12单克隆抗体具有中和rChIL-6的促进7TD1细胞增殖的能力。本研究成功构建了ChIL-6成熟肽基因的原核表达质粒,并且获得了具有活性的rChIL-6蛋白,研制出3株针对ChIL-6单克隆抗体,其中1株单克隆抗体具有中和活性。ChIL-6单克隆抗体的制备为建立天然ChIL-6的检测方法和研制ChIL-6治疗剂奠定基础。
其他文献
前言西尼煤田的绝大部分可采煤层位于凯普布利敦岛海岸边的大西洋海底,需要开拓长达3～7公里的巷道才能进入煤层。凯普布利敦开发公司清楚地认识到需要在最有利的条件下开采这
根据沈北煤田软岩巷道支护的实际条件,模拟制作巷道模型,并进行加载试验,取得了相应参数,为具体施工提供了重要的参考数据。
According to the actual conditions of soft r
素质教育的核心是培养学生的创新能力和创造性思维，强调通过科学的教育途径，充分开发学生个体的潜能，从而提高学生个体的思想素质、文化素质、心理素质、个性素质。要实现创新教学的目标，就要求在教师的指导下，学生积极参与到教学的各个环节中，充分体现学生的主体地位。我国思品课教学还远远没有做到这一点。主要原因之一是学生的主体意识没有得到真正的培养。而没有主体意识，就不可能有自觉的主体行为，就不能真正贯彻素质教
丽江县万亩旱地麦杂１４获丰收丽江县农技推广中心６７４１００石星河小麦是我县的主要粮食作物，历年的小麦播种面积均在２１万亩左右，平均单产低，其主要原因是无水灌溉的山地、坡地多，约占６９％，有水灌溉的
摘 要： 新课改的实行促使教师重新审视自己的教学模式。如今，课堂教学目标已不只是知识的传输，更重要的是对学生各方面素质的培养。在初中历史课堂教学中，教师需要通过自己的教学方式的改变来培养学生的创新能力。如何才能成功完成这个任务是每个历史教育工作者需要深思的问题。 关键词： 初中历史 教学方式 创新能力 我们身处的社会在不断发展和变化着，当下需要的是具有创新能力的人才。新课改在如火如荼地进行着，
为了进一步提高猪冷冻精液解冻后的品质,为抗凋亡试剂在猪精液冷冻中的应用提供参考数据,本研究采用手握法采集成年种公猪精液,预处理后用添加不同剂量褪黑素(0、1、5、10mmo
摘 要： 随着新课程改革的不断推进，其对现在的课堂教学模式提出了新的要求，在这样一个背景下，高中历史课堂教学有了新的要求，以促进学生全面发展为根本，培养学生独立思考能力，从而营造一个积极开放的课堂教学环境。高中历史课堂教学的时间为45分钟，如何在课堂教学这样一个时间里完美地完成教学任务，成为老师们共同关注的话题。本文首先阐述了有效性教学的概念，接着从设置教学情境、借助多媒体教学、采取设置问题教学三
蹄疣性皮炎是危害奶牛养殖业的重要疾病之一。本试验对保定地区蹄疣性皮炎的流行病学进行了调查，发现该病具有明显的季节性，以夏季发病率最高;在年龄方面，2-4岁的奶牛发病率最高
摘 要： 随着科技的进步，现代课堂的教学模式已经发生了改变。传统教学方式就是教师板书，学生记笔记，费时又费力。现代课堂采用多媒体技术，可以提高教学效率，而且能够更直观地表达出课堂教学内容。本文就如何在物理课堂教学中有效利用多媒体技术展开讨论。 关键词： 物理教学 多媒体技术 有效利用 一、什么是多媒体技术 多媒体技术是指通过计算机对文字、数据、图形、图像、动画、声音等多种媒体信息进行综合处理
摘 要： 与传统的物理课堂相比，新课程背景下的高中物理课堂将学习的重心由知识积累转化为能力培养，由学生被动接受知识转化为主动探究，由教师的一味灌输转化为多样化、现代化教学模式的构建。在具体的教学实践中，作者积极拓宽自己的知识面，创设有效的教学情境，培养学生的质疑意识；师生合作，开展研究性学习活动；让网络技术有效渗透于具体的实验教学活动中，多措并举，为培养学生的科学探究能力不遗余力。本文中所述的拙见