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温度是蝴蝶兰成花诱导的关键因素。论文研究了不同温度处理对蝴蝶兰成花诱导的影响并对蝴蝶兰在25℃/20℃(日/夜温度,下同)处理过程中腋芽的形态学变化进行了观察;还研究了25℃/20℃处理对蝴蝶成花诱导过程中叶片和腋芽中的碳氮变化的影响;利用DDRT-PCR技术克隆了与蝴蝶兰成花诱导相关的cDNA片段。主要研究结果如下:
1.将粉色蝴蝶兰‘KM833’和紫色蝴蝶兰‘SH961’置于不同温度组(22℃/16℃、23℃/18℃、25℃/20℃、30℃/28℃)的人工气候箱进行成花诱导,结果表明:与对照组(温室大棚)相比,三个低温处理组:22℃/16℃、23℃/18℃、25℃/20℃都能诱导两个品种的蝴蝶兰提早抽出花序轴及开花,两个品种的蝴蝶兰最佳诱导温度是25℃/20℃;25/20℃使两种蝴蝶兰完成成花诱导,提早现蕾和开花,增加每个花序轴的花朵数,并能提高蝴蝶兰的双梗发生率;高温30℃/28℃处理期间(200d)两种蝴蝶兰都一直未见花序轴抽出,蝴蝶兰一直处于营养生长状态。25℃/20℃处理只有20d以后转入高温30/28℃才有可能有花序轴的抽出,但花序轴的生长受阻。高温处理完成诱导后的蝴蝶兰不仅降低其花序轴的双梗发生率,而且严重抑制花序轴的生长(高度和直径),同时也抑制侧枝的形成。高温处理虽然能使蝴蝶兰的现蕾期和始花期提早,但严重阻碍其现蕾和开花,主要表现为花蕾变干、变黄,而后枯萎脱落。
2.通过石蜡切片观察蝴蝶兰‘KM833’在25℃/20℃试验处理期间(30d)可将蝴蝶兰花芽的形态发生与发育过程分为三个阶段:(1)成花诱导期;(2)花序原基分化期;(3)花芽分化期。25℃/20℃试验处理的0~10(或15)d属于成花诱导期,此后为花序原基分化期,大约25d后则是花芽分花期。
3.对照组(温室大棚生长条件)的粉色蝴蝶兰(KM833)新叶开始时面积增长较快,但最终的叶面积与处理组(25℃/20℃)的大小基本相同,处理组的单位叶面积干样质量在15d后超过对照组;对照组的蝴蝶兰叶片还原糖含量在整个试验期间则较为恒定且缓慢地增长,腋芽中的还原糖则随时间而下降;两种处理蝴蝶兰叶片的可溶性糖和淀粉均随着时间的进程而逐步升高,处理组的蝴蝶兰腋芽中的可溶性糖和淀粉含量则在处理15d内有个快速地增加后缓慢下降的过程,对照组腋芽的三类碳水化合物在处理期间处于上升趋势。无论在叶还是腋芽中诱导组的碳水化合物的含量均高于对照组。25℃/20℃处理在15d内叶片和腋芽的总糖含量大于对照组,叶片的总氮含量在这段时期也高于对照组,但25℃/20℃处理10d内的腋芽总氮含量却减少,而且在整个试验期间都低于对照组。蝴蝶兰叶片中的C/N在25℃/20℃处理15d内不断下降,而在腋芽中的C/N值则明显上升,这可能是蝴蝶兰成花决定的重要影响原因之一。
4.利用荧光DDTR-PCR技术从蝴蝶兰‘KM833’成花诱导过程中的叶和腋芽中共分离了39条差异cDNA片段,克隆到载体上共34条,成功测序共有15条,同源性比对显示同源性较低,这表明迄今为止它们的功能仍是未知的。NorthernBlot分析获得1条阳性表达片段(N0.20)。