中条山丹参突变体的转录组分析研究

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丹参(Salvia miltiorrhizaBunge)属于双子叶植物唇形科鼠尾草属植物,是中国传统中药,主要以干燥根部入药。丹参具备的特征有:生长期短、易培育、繁殖方式多样、对环境要求低、基因组小、染色体数目少(2n=16)等,有利于分子生物学和遗传学的分析。丹参作为重要的传统中药,针对它的高通量测序、功能基因研究、体内药用成分的分析和作用机理等研究也纷纷展开。本研究以中条山二倍体植株和中条山突变体为材料展开。为了更好的了解突变体产生根部粗大的机制,我们在对对照组和实验组提取了RNA之后,运用Illumina二代测序方法进行了转录组测序并进行分析。本研究主要结果如下:  1.用去壁低渗法对中条山丹参和突变体进行核型分析,结果表明,突变体植株较正常二倍体细胞核内多了一条小染色体段片;  2.转录组测序数据经除杂组装后共得到46770条Unigene,长度在1Kb以上的有15394条。基因结构分析获得ORF46481个,SSR有63058个,SNP位点有1005151个;  3.中条山二倍体丹参与突变体的差异表达分析,得到差异基因数目为5087条,其中表现上调的基因有2230条,表现下调的基因有2857条。  4.通过生物信息学对测序数据进行注释,包括与NR、Swiss-Prot、KEGG、COG、GO数据库的比对,共获得33,586条Unigenes注释结果。  5.通过qPCR,成功验证了18个基因的相对表达量与测序结果一致,证明了测序数据的准确性。  6.挑选出了几个与细胞分裂,抗逆和根生长相关的基因,并对其进行了序列分析。其中两个与根生长相关基因进行克隆,构建了遗传转化载体,成功的转入了拟南芥对基因的功能进行初步的分析。
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