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肺癌是我国大中城市发病率最高的肿瘤，据世界卫生组织统计每年肺癌新发病例超过120万，每年因肺癌死亡的人数高达110万，肺癌已经成为癌症第一杀手。非小细胞肺癌占肺癌的85％以上。外科手术、放射疗法、靶向药物、化学疗法等都可在病人的不同分期和不同情况下用于非小细胞肺癌的治疗。对于不能手术切除或不耐受手术切除的病人，根治性放疗是最好的选择方法。而反复放疗的患者往往治疗效果不佳，究其原因主要是肺癌辐射抵抗细胞的存在。逆转放射抵抗将对肺癌的治疗具有重大意义。(unmcthylated cytosine-phosphateguanine oligodeoxynucleotides，CpG ODN)7909是含非甲基化二核苷酸的寡脱氧核苷酸序列，作为一种免疫激活剂，近年来发现其可以增加肿瘤放射治疗敏感性。我们课题组前期已经证实CpG ODN7909（最佳有效浓度为10ug/ml）可以有效提高肺腺癌细胞株A549细胞的辐射敏感性，且其在荷瘤小鼠体内的辐射敏感性也明显提高。其辐射敏感性在于CpG ODN可以激活机体的免疫系统，抑制肿瘤细胞生长引发细胞的G2/M期阻滞，而G2/M肿瘤细胞的辐射敏感性最强。 在我们课题组先前工作的基础上，我们试图探讨CpG ODN7909对放射抵抗的肺癌细胞是否同样具有放射敏感性及其相关的机制如何。我们通过前人反复分割照射肿瘤细胞的方法获得了一株辐射抵抗性稳定的辐射抵抗细胞并将其命名为R-A549细胞株。随后用CCK-8和细胞克隆扩增的实验方法验证了该辐射抵抗细胞株R-A549细胞与普通肺腺癌A549细胞其在不同的放射治疗剂量点2.4.6.8.10Gy的细胞存活率。结果表明R-A549细胞产生了明显的辐射抵抗性，其平均致死剂量DO与A549细胞相比分别是1.60Gy±0.50 vs1.76Gy±0.25，其N值分别为2.42±1.10 vs4.96±0.32。细胞株R-A549及A549细胞分别分为四组:空白对照组，X线照射组，单纯CpG组，CpG+X线射线照射组。这些细胞分别接种于6孔板中，到达对数生长期后给予以上处理，随后24h后，通过HE染色观察R-A549细胞与A549细胞在不同的处理条件下细胞形态的差异。结果显示A549细胞和R-A549细胞形态上没有明显的差别，A549细胞显示明显的梭形状态，而R-A549细胞中多边形细胞比例增多，体积稍增大。经过单纯的CpG处理和X线照射处理后A549细胞和R-A549的形态没有产生明显的差别，但经过CpG和X线联合处理后，两组细胞均体积变大，细胞膜损伤，呈现细胞坏死的状态。CCK-8方法检测R-A549细胞与A549细胞增殖动力学特点，结果显示R A549倍增时间大于A549细胞倍增时间。随后将R-A549细胞分为如上四组，其不同处理下生长速度均变慢，然而CpG处理组与对照组生长速度没有明显的差别，CpG+X线照射组生长速度最慢。用克隆扩增的方法检测CpG ODN对R-A549细胞的辐射敏感性，结果表明CpG ODN对R-A549细胞显示了明显的辐射增敏性，其平均致死剂量相比于对照组而言分别为1.33Gy±0.20 vs1.76Gy±0.25，N值为3.44±1.01 vs4.96±0.32.western blot技术检测R-A549细胞与A549细胞TLR-9表达的差别，结果显示R-A549中TLR-9受体表达明显提高。通过流式细胞仪检测到R-A549细胞其CpG+X线照射组中G2/M期细胞比例明显增加，此期细胞辐射敏感性最强。因此，我们的研究表明CpG ODN7909明显增加了辐射抵抗细胞株R-A549细胞的辐射敏感性，与其TLR-9受体表达明显增加及细胞周期G2/M期阻滞增加相关。