β-淀粉样蛋白诱导星形胶质细胞分泌组织蛋白酶B的研究

来源 :哈尔滨医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:iyt1713
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目的:研究β-淀粉样蛋白(β-amyloid protein,A β)对星形胶质细胞活性、形态学以及分泌炎性因子的作用,初步探讨星形胶质细胞介导的免疫炎性机制在阿尔茨海默病(AlzheiIner’s disease,AD)发病中的作用。 方法:取新生第2~3d Wistar乳鼠,无菌操作下取其大脑皮质,剪碎、胰酶消化结合机械吹打使细胞分散,网筛过滤,差速粘附处理去除成纤维细胞,将未粘附的细胞悬液接种培养9~12d,细胞传代,免疫细胞化学方法进行星形胶质细胞鉴定:观察加入5~60umol/L A β<,1-40>后细胞形态学改变,四唑盐法检测细胞活性,western blot法测定细胞上清组织蛋白酶B(Cathepsin B,CTSB)水平。 结果:成功分离培养了原代星形胶质细胞,并进行了星形胶质细胞的纯化,GFAP鉴定星形胶质细胞比例为95%以上。星形胶质细胞在5~60umol/L新鲜的Aβ<,1-40>作用24h条件下,细胞形态无明显变化,细胞的活性没有受到影响,与对照组比较差异无显著性意义(P>0.05)。细胞上清液中检测到CTSB。 结论:新鲜的A β <,1-40>可诱导星形胶质细胞释放CTSB,且与A β <,1-40>的剂量有关,新鲜的A β <,1-40>对星形胶质细胞无明显毒性作用。CTSB可能与A β引起的细胞毒性作用有关。
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