负载ALA的W1/O/W2荧光微乳液的制备及其在细胞内的荧光示踪

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α-亚麻酸(ALA)是人体必需的一种多不饱和脂肪酸(PUFA),在人类健康和营养强化中起着至关重要的作用,其自身具有三个不饱和双键,容易被氧化,极大地限制了应用,而含有独特亲水和疏水多间隔结构的水包油包水(W1/O/W2)型微乳液,在包埋和递送不稳定活性营养物质及药物方面具有独特优势。
  本研究采用“两步变温法”制备W1/O/W2型微乳液,首先通过伪三元相图在45℃下构建油包水型(W/O)微乳液,随后冷却至室温,将W/O型微乳液再次分散至外水相制得W1/O/W2型微乳液。对于负载ALA的W1/O/W2型(ALA-W1/O/W2)微乳液,通过核磁共振氢谱(NMR)证实ALA在包封过程中,可同时在水油界面发生聚集和扩散效应。与负载ALA的O/W型(ALA-O/W)微乳液相比,ALA-W1/O/W2型微乳液将其荧光强度提高了7.75-20.15%,在8h时,ALA-W1/O/W2型微乳液将ALA的释放速率减缓了60.46-67.57%。
  探究内外水相添加的多尺度分子对ALA-W1/O/W2型微乳液理化性质、抗氧化能力和体外释放动力学的影响。分别选择葡萄糖(Glu)和羧甲基纤维素钠(CMC)溶液作为微乳液的内水相(W1),选择多尺度分子氯化钠(NaCl)、甘氨酸(Gly)、Glu、CMC、牛血清白蛋白(BSA)和酪蛋白酸钠(SC),添加到外水相(W2)以平衡渗透压。其中,CMCW1(0.1%(w/w))-NaClW2(0.2 M)和GluW1(0.2 M)-CMCW2(0.2%(w/w))微乳液分别将ALA抗氧化能力提高了5.57%和4.20%。通过分析模拟体外释放结果,显示Korsmeyer-Peppas方程是解释ALA释放动力学的最适方程,其在模拟胃环境(SGF,pH=2.0)和肠环境(SIF,pH=6.8)下的释放主要通过扩散和溶蚀效应共同作用。
  利用细胞计数试剂盒8(CCK-8)、乳酸脱氢酶(LDH)分析试剂盒和荧光显微镜探究了ALA-O/W型和ALA-W1/O/W2型微乳液对细胞活力、LDH活力和活性氧(ROS)水平的影响。CCK-8分析表明,ALA以剂量依赖的方式抑制MDA-MB-231人乳腺癌细胞增殖,LDH活力和ROS水平结果显示ALA诱导癌细胞损伤与氧化应激密切相关。在紫外光下,与癌细胞共同培养的ALA-O/W型和ALA-W1/O/W2型微乳液具有长期光稳定性,同时可根据荧光强度变化对ALA的释放进行实时监控。此外,通过微乳液的自组装结构,将表面活性剂聚集在油水界面,推断出表面活性剂分子引起聚集诱导发光(AIE)效应的荧光机理。
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