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[研究背景]：诸多研究表明冠状动脉粥样硬化心脏病是一种炎症性疾病。在炎症发生发展过程中,激活的CD4+及CD8+T细胞发挥着重要作用,而它们的激活需要各种信号通路的共刺激作用；其中除主刺激信号MHC-抗原肽及B7-CD28形成的双信号通路途径作用之外,辅助信号通路途径也是T细胞激活过程中必不可少的条件之。肿瘤坏死因子超家族成员(TNFSF)和肿瘤坏死因子受体超家族成员(TNFRSF)之间能够形成T细胞激活所必须的各种辅助信号通路,如CD40／CD40L,OX40／OX40L,4-1BB／4-1BBL,CD70／CD27和TLlA／DR3等。通过多个人群中的关联分析及基因差异表达研究表明,OX40／OX40L信号通路在冠状动脉粥样硬化心脏病的发生发展过程中具有重要作用。遗传学研究及功能研究提示人类的TNFSF4基因(编码OX40L)及TNFRSF4基因(编码OX40)很可能作为重要的冠状动脉粥样硬化心脏病易感基因在疾病发生中起作用。由于基因中多态位点与复杂疾病的关联具有人群特异性,目前在山东汉族人群内尚未对TNFSF4基因及TNFRSF4基因多态位点与冠状动脉粥样硬化心脏病的相关性进行研究。[研究目的]：利用病例-对照关联分析研究方法探讨TNFSF4基因内的5个单核苷酸多态位点(SNPs)及TNFRSF4基因内的1个SNP与山东汉族人群冠状动脉粥样硬化心脏病之间的相关性,这些多态位点分别是：TNFSF4基因启动子区域2个SNPsrs1234314和rs45454293,第一内含子区域的2个tag SNPs rs3850641和rsl234313,第二内含子区域的1个tag SNP rs3861950;TNFRSF4基因第五内含子内的1个与功能位点rs2298211处于完美连锁不平衡的代理SNP位点rs2298212。[研究方法]：1.病例组与对照组样本收集：在山东汉族人群中收集冠状动脉粥样硬化心脏病患者及正常对照,抽取外周血并提取基因组DNA。所收集的冠状动脉粥样硬化心脏病患者均符合冠状动脉疾病的诊断标准,并行冠脉造影鉴定；正常对照均为汉族且无亲缘关系、至少三代以内居住在山东的健康体检人群的随机个体,并通过病史、查体、心电图和胸片排除器质性心脏病。2.基因分型,基因型及等位基因频率统计：采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态(PCR-RFLP)的方法在病例组与对照组所有个体中对各个多态位点进行基因分型。根据琼脂糖凝胶电泳结果确定个体基因型,计算各位点在病例组与对照组中的基因型频率及等位基因频率。3. Hardy-Weinberg平衡吻合度检验：根据Hardy-Weinberg平衡定律计算各多态位点在病例组和对照组中的预期基因型频率,利用卡方检验比较观察到的基因型频率与预期基因型频率间的差异,以P<0.05表示差异具有统计学意义。若P>0.05则说明选取的病例组与对照组处于遗传平衡状态,具有群体代表性。4.基因型与等位基因分布差异检测：利用卡方检验比较各多态位点在病例组与对照组间的基因型频率及等位基因频率差异,以P<0.05表示差异具有统计学意义。若某多态位点的基因型频率及等位基因频率在组间具有统计学差异,即P＜0.05,说明该多态位点与冠状动脉粥样硬化心脏病具有相关性；反之则与此疾病无相关性。为验证基因型与等位基因频率分布是否具有性别特异性,特进行男女分层分析,观察在不同性别下,各多态位点与冠状动脉粥样硬化心脏病是否具有相关性,以P＜0.05表示差异具有统计学意义。5.病例组中冠脉受累分支分析：按照冠状动脉受累支数对病例组进行分层,以Judkins方法行选择性冠状动脉造影,根据造影结果统计病变支数(左主干、前降支、回旋支、右冠状动脉或其主要分支狭窄≥50%),分为1、2、3支病变；观察不同受累支数之间基因型和等位基因频率分布是否具有差异性。6.现有样本的统计学效力检验：利用PGA软件(Power for Genetic Association Analysis, PGA)计算现有样本能够提供的统计学效力,以避免由于Ⅱ类错误引起的假阴性结果。[研究结果]1. TNFSF4基因rs1234314, rs45454293, rs3850641, rs1234313, rs3861950位点在山东汉族人群中具有多态性；五位点在病例组与对照组中均处于遗传平衡状态；基因型和等位基因频率分布在病例组及对照组间的差异均无统计学意义(P>0.05)。比较不同受累支数之间基因型与等位基因频率分布发现,在冠脉受累各支之间各位点基因型和等位基因频率分布差异也无统计学意义。2. TNFRSF4基因rs2298212多态位点在山东汉族人群中具有多态性；在病例组与对照组中均处于遗传平衡状态；基因型和等位基因频率分布在病例组与对照组间无统计学差异(P>0.05)。比较不同受累支数之间基因型与等位基因频率分布发现,在冠脉受累1支与3支之间,基因型及等位基因频率分布方面均具显著性差异(P＜0.05)。3.应用PGA软件,在检验水准α=0.05,罕见等位基因频率假定为0.17,0R假定为1.4,连锁不平衡系数为1的假定条件下,现有样本的统计效力超过了80%。[研究结论]1. TNFSF4基因rs1234314,rs45454293,rs3850641,rs1234313,rs3861950位点与山东汉族人群冠状动脉粥样硬化心脏病之间无相关性。该结果有待于利用更大的样本和不同人群的病例对照研究来进行验证。2.OX40基因rs2298212G／A多态位点与山东汉族人群冠状动脉粥样硬化疾病的严重程度具有相关性。该结果有待于利用更大的样本和不同人群的病例对照研究来进行验证。