【摘 要】
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目的:研究槲皮素(Que)对体外培养的转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的新生 SD大鼠心肌成纤维细胞(CBFs)增殖及肌动蛋白-α(α-SMA)表达的影响,探讨槲皮素抑制心肌纤维化的作用机制。方法:1.心肌成纤维细胞分离、培养与鉴定:用胰酶消化组织分离细胞,差速贴壁法纯化获得心室肌成纤维细胞为材料,用光学显微镜和免疫细胞化学的方法鉴定细胞。2.检测方法:采用WST-1检测心肌成纤维细胞增殖情
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目的:研究槲皮素(Que)对体外培养的转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的新生 SD大鼠心肌成纤维细胞(CBFs)增殖及肌动蛋白-α(α-SMA)表达的影响,探讨槲皮素抑制心肌纤维化的作用机制。方法:1.心肌成纤维细胞分离、培养与鉴定:用胰酶消化组织分离细胞,差速贴壁法纯化获得心室肌成纤维细胞为材料,用光学显微镜和免疫细胞化学的方法鉴定细胞。2.检测方法:采用WST-1检测心肌成纤维细胞增殖情况,采用流式细胞仪分析对心肌成纤维细胞周期的影响,免疫细胞化学染色(SABC法)观察心肌成纤维细胞的α-SMA的表达情况。3.实验分组:将心肌成纤维细胞传代培养后,根据不同的药物及药物的不同浓度,将实验分为三个部分。第一部分:观察Que对基础状态下的心肌成纤维细胞是否有影响。共分四个组:空白对照组及不同浓度的 Que(50μmol/L、25μmol/L、12.5μmol/L)组。第二部分:观察Que对 TGF-β1诱导的心肌成纤维细胞的增殖及α-SMA表达的影响。共分为五个组:空白对照组,TGF-β1诱导增殖对照组,不同浓度的 Que(50μmol/L、25μmol/L、12.5μmol/L)+TGF-β1组,TGF-β1的终浓度为5μg/L。第三部分:观察 Que对TGF-β1诱导的心肌成纤维细胞的细胞周期影响共分为四个组:TGF-β1诱导增殖对照组,不同浓度的 Que(50μmol/L、25μmol/L、12.5μmol/L)+TGF-β1组,TGF-β1的终浓度为5μg/L。(4)数据处理:用SPSS13.0软件包；细胞活度OD值数据用均数±标准差(x±s)表示,单因数方差分析进行统计学处理,卡方检验,两两比较采用标准四格表法,检验水准为P<0.05有统计学意义。结果:1.培养的细胞经过光学显微镜和免疫细胞化学染色的方法鉴定为心肌成纤维细胞,纯度95％以上。2.Que在基础状态下对心肌成纤维细胞的增殖无明显抑制作用。Que各浓度组(50μmol/L、25μmol/L、12.5μmol/L)的 OD值与空白对照组比较无显著性差异(P>0.05)。3.QUE呈浓度依赖性地抑制 TGF-β1诱导的心肌成纤维细胞增殖作用,QUE各浓度组 OD值明显低于 TGF-β1组(P<0.05),OD值随QUE浓度的增加而减少,各浓度组之间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。4.QUE呈浓度依赖性阻止TGF-β1诱导的心肌成纤维细胞由 G0/G1期进入S期,QUE各浓度组S期的细胞数明显低于TGF-β1组(P<0.05)；5.QUE呈浓度依赖性地抑制TGF-β1诱导的心肌成纤维细胞的α-SMA上调,QUE各浓度组平均积分光密度(AIOD)值明显低于TGF-β1组(P<0.01),AIOD值随QUE浓度的增加而减少,各浓度组之间比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:1.QUE对基础状态下心肌成纤维细胞增殖无明显地抑制作用,但呈浓度依赖性对TGF-β1诱导的心肌成纤维细胞增殖的有一定地抑制作用,表明QUE对应激状态下的心肌成纤维细胞增殖有一定地抑制效应；2.QUE呈浓度依赖性阻止 TGF-β1诱导的心肌成纤维细胞由G0/G1期进入S期,并能明显抑制TGF-β1的诱导心肌成纤维细胞的α-SMA表达,这可能是 QUE抑制 TGF-β1的诱导心肌纤维化的途径之一。
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