【摘 要】
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神经节苷脂GD2在正常的组织细胞中很少存在,而在黑色素瘤、小细胞肺癌、等肿瘤细胞表面大量存在.因此能特异性结合神经节苷脂GD2,激活肿瘤附近免疫细胞功能的基因工程融合蛋
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神经节苷脂GD2在正常的组织细胞中很少存在,而在黑色素瘤、小细胞肺癌、等肿瘤细胞表面大量存在.因此能特异性结合神经节苷脂GD2,激活肿瘤附近免疫细胞功能的基因工程融合蛋白将为上述肿瘤的治疗开辟新的途径.实验中采用重叠PCR技术,将抗神经节苷脂GD2的单链抗体和抗CD16(FcγRIIIA)分子的单链抗体用(GGGG4S)<,3>和SGGGGS两种连接肽连接,形成两个新型的anti-GD2/anti-CD16单链双特异性抗体基因N1M1和N2M2,将重组基因分别连接表达载体pSE380和pET22b(+),得到重组质粒pSE380-N1M1/pSE3 80-N2M2和pET22b(+)-N1 M1/pET22b(+)-N2M2.采用Ni-NTA亲和层析和分子筛层析纯化上述三种融合蛋白,纯度可达95％以上.用LDH法检测其对肿瘤的杀伤作用,实验结果证明:实验构建的单链双特异性抗体n1ml和n2m2均可以激活单个核细胞(PBMC),杀伤GD2阳性肿瘤细胞;IL-2与抗GD2单链抗体融合蛋白IL-2-m对GD2阳性肿瘤细胞也起到一定的杀伤作用;anti-GD2/anti-CD16单链双特异性抗体与融合蛋白IL-2-m联用效果更为显著.
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