BMP2和P6-BMP2的克隆、表达、纯化及其生物活性的研究

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骨形态发生蛋白是转化生长因子β(TGF-β)超家族的成员,属于二硫键交联的生长和分化因子,是一类具有多种功能的细胞因子家族,其中,BMP2是唯一的能够单独诱导异位成骨的骨形成蛋白家族成员。在本文中,将BMP2的成熟肽基因序列构建在原核表达载体pET28a中,在BL21(DE3)中采用分子伴侣共表达和低温表达相结合,在大肠杆菌中实现了可溶性的具有生物活性的重组BMP2的表达,并通过在BMP2的N端添加一个6个氨基酸的细胞连接肽,构建了P6-BMP2。非还原性SDS—PAGE分析表明,BMP2和P6-BMP2都以二聚体形式存在。经NI柱层析,EK酶切,肝素柱亲和层析后,得到BMP2和P6-BMP2的蛋白纯品,经SDS—PAGE电泳检验为一条带。动物实验结果表明,BMP2和P6-BMP2都能明显的诱导成纤维细胞生成,而到第三周40μg的BMP2诱导出软骨细胞。本文第一次实现了重组BMP2在大肠杆菌中的可溶性表达。
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