降钙素原胶体碳免疫层析检测技术的研究

来源 :三峡大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cathy1989
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目的:降钙素原(PCT)作为严重性感染、脓毒症以及多脏器衰竭的生物标志物,与C-反应蛋白、IL-6、IL-8、白细胞计数等一样可作为一种临床辅助诊断检测指标,同时表现出更高的特异性。本研究的目的是以新型纳米材料-胶体碳为探针,基于侧向流免疫层析技术,研制降钙素原定量免疫层析快速检测试剂。  方法:侧向流免疫层析方法(LFIA)是最为常见的即时诊断(又称床旁诊断,简称POCT)检测手段。本研究采用双抗体夹心法,胶体碳探针标记的PCT抗体固化在碳垫上;与之配对另一株PCT捕获抗体则被固定在硝酸纤维素膜(NC膜)的检测区域(又称 T线),质控线(C线)由羊抗鼠IgG抗体组成;组装好的试纸条样本端浸入阳性样品(尿液或血清)时,样品在毛细层析作用下,沿膜向吸水纸端爬行,经过抗体固定区域时,与胶体碳标记抗体结合的抗原抗体复合物被固定在膜上的捕获抗体捕获,并呈现胶体碳的颜色,C、T线同时出线表明样品为阳性;C线出线而T线不出线则为阴性,C、T线都不出线则为无效检测。通过检测C、T的光密度比值可以实现对PCT的定量检测。  结果:  (1)获得了粒径均一的胶体碳试剂;  (2)选择合适的辅料,对试剂研发进行优化;  (3)研发的PCT检测试剂灵敏度可达到0.2 ng/ml,4℃放置储存6个月灵敏度基本不变,精密性满足临床检测要求。  结论:在国内首次研发出基于胶体碳标记的 PCT快速检测试剂,可用于临床样本的PCT的体外检测,是临床辅助诊断的可靠手段。
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