论文部分内容阅读
目的：慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia, CML)是一种恶性髓系造血干细胞增生性疾病,目前仍缺乏有效的根治方法。酪氨酸激酶抑制剂靶向治疗加过继免疫治疗,是治疗慢性粒细胞白血病比较理想的治疗策略。近年来,格列卫和干扰素α治疗对CML患者机体免疫调节的影响备受关注和争议。本课题试图应用可溶性PR1HLA-A*0201四聚体,检测CML患者体内PR1特异性CTL细胞,探索格列卫、干扰素α治疗对CML患者特异性细胞免疫功能的影响,为CML的临床治疗提供相关实验依据。研究对象：慢性粒细胞白血病患者方法：首先,分别对采用羟基脲、干扰素、格列卫治疗的30例CML患者进行临床随访,监测治疗过程中的血象、骨髓细胞形态、Ph染色体及BCR-ABL融合基因等指标的变化情况,分析其血液学缓解率(HR)、细胞遗传学缓解率(CyR)和分子学缓解率(MR)以及各自缓解的中位时间,以判断三种不同治疗方案组的疗效。然后,为了检测CML患者体内PR1特异性细胞毒T淋巴细胞的水平,我们应用基因工程技术制备PR1抗原肽HLA-A*0201单链三聚体(single chain trimer,SCT),利用BirA酶使其生物素化,生物素化的SCT与PE标记的链霉亲和素按摩尔比4：1混合,制成PR1HLA-A*0201四聚体,作为体外研究PR1特异性CTL的检测工具。最后,收集临床CML患者骨髓或外周血标本,分离单个核细胞,用HLA-A*0201单抗流式细胞仪分析、筛选HLA-A*0201阳性患者(17/45,占37.8%)。以PR1HLA-A*0201四聚体为工具,检测11例HLA-A*0201阳性CML患者骨髓或外周血PR1-CTLS。这11例CML患者中,5例接受格列卫治疗、3例接受干扰素治疗、3例为初诊患者。结果：1、接受格列卫、干扰素、羟基脲治疗的CML患者均有较好的CHR率,分别为100%、88.9%和66.7%,格列卫治疗组CML患者的血液学缓解中位时间为23d,比干扰素和羟基脲治疗组明显缩短(分别为75d、64d)。格列卫治疗组中72.7%患者能够达到CCyR,中位时间为6个月,而50%患者能达到MR,中位时间18个月。干扰素治疗组患者中44.4%能达到CyR,所需时间长达27.5个月,但没有患者达到分子水平缓解。羟基脲治疗组患者均没有达到细胞遗传学或分子水平缓解。2、PR1HLA-A*0201四聚体选择性结合PR1特异性CTLs,可以作为研究PR1特异性CTL细胞的实验工具。3、初诊CML患者体内PR1-CTL细胞极低(0.02±0.02),经干扰素、格列卫治疗的CML患者体内PR1-CTL细胞分别为0.1167±0.025,0.12±0.014,有显著性差异(P<0.05),而格列卫治疗组与干扰素治疗组比较无统计学差异(p=0.823)。CML患者PR1-CTLs频率与Sokal积分之间呈有负相关(r=-0.892,P<0.001)。结论：1、我们制备的PR1HLA-A*0201四聚体可以作为研究PR1特异性CTL细胞的实验工具,为本实验研究奠定了相关基础。2、PR1-CTLs在CML患者的免疫监视功能和免疫功能重建中具有重要作用。3、CML患者PR1-CTLs频率与Sokal积分之间呈负相关,表明患者肿瘤负荷越低,Sokal积分值越低,PR1-CTLs频率越高,即可能预后越好。