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目的：通过综合多种因素复制血瘀型肝纤维化大鼠动物模型，动态观察OPN在肝纤维化中蛋白质和基因表达的变化特征，及其与PAI-1是否存在相互关系影响肝纤维化的进程，初步探讨OPN在肝纤维化形成过程中的作用机制；并研究中药灵甲胶囊对血瘀型肝纤维化大鼠OPN和PAI-1表达的影响，以进一步探讨灵甲胶囊的抗纤作用机制。
方法：实验采用健康wistar雄性大鼠120只，体重150±10g，给予腹腔注射二甲基亚硝胺，并且用去甲肾上腺素加小牛血清白蛋白多次尾静脉注射复制血瘀型肝纤维化模型。将大鼠随机分为6组：正常对照组、DMN组、血瘀组、动态观察组、灵甲胶囊组、复方鳖甲软肝片组。其中正常对照组10只，与造模组同时腹腔注射0.9％生理盐水0.2ml/100g体重，自由饮水，饲食；DMN组15只，每周1，2，3连续三天腹腔注射0.5％DMN 0.2ml/100g体重，每日一次，注射三周，稳定一周；血瘀组30只，除注射DMN外，第二周起以NE 0.1ml/100g体重尾静脉缓慢注射，每天一次，共四周造模结束；同时第一天和第十天造模时还要尾静脉注射BSA 0.25ml/100g体重。动态观察组35只，按血瘀组方法造模。于造模开始后第7、14、21天随机抽取10只大鼠取肝组织检测OPN及PAI-1表达。灵甲胶囊组15只，前四周制作血瘀型肝纤维化模型，方法同血瘀组。四周后以灵甲胶囊灌胃，每天一次，治疗8周。复方鳖甲软肝片对照组15只，前四周制作血瘀型肝纤维化模型，方法同血瘀组。四周后以复方鳖甲软肝片灌胃，每天一次，治疗8周。腹主动脉采血，处死大鼠，并留取肝组织标本，分别测定肝功能(ALT，AST)、称量肝脏及脾脏重量、测量脾脏长轴长度，并作肝组织常规HE染色，天狼猩红染色，通过免疫组化染色、RT-PCR、Western blot 动态观察肝组织中OPN、PAI-1蛋白和基因表达的情况、分布状况以及中药灵甲胶囊在纤维化治疗过程中对其的干预情况。
结果：
1、血清肝功能测定：血瘀型肝纤维化组、肝纤维化组、动态观察组不同时间段各组ALT、AST在造模结束时均高于正常组(P<0.05)。接受治疗后，灵甲胶囊组及复方鳖甲软肝片组的大鼠较血瘀组ALT均有降低(P<0.05)，其中灵甲胶囊较复方鳖甲软肝片显著降低AST (P<0.05)。
2、免疫组化染色OPN及PAI-1定位：正常肝脏中OPN阳性表达极低，血瘀型肝纤维化大鼠肝脏中OPN阳性表达明显增强，主要见于小叶内中央静脉周围、纤维间隔内以及周围巨噬细胞胞浆，肝窦内皮细胞，汇管区的部分肝细胞胞浆中亦呈阳性表达。PAI-1在正常肝组织中央静脉、肝动脉、门静脉及肝血窦腔面可见阳性表达的染色。血瘀型肝纤维化大鼠肝组织汇管区、肝细胞变性坏死处，肝窦周Disse间隙及毗邻以上部位的肝细胞浆，纤维间隔处及其外周细胞可见PAI-1明显阳性染色。
3、血瘀型肝纤维化模型及肝纤维化模型OPN及PAI-1的蛋白表达水平较正常组均升高，动态观察组各时间段的大鼠肝组织OPN及PhI-1的蛋白表达呈增强趋势，灵甲胶囊及复方鳖甲软肝片治疗后OPN及PAI-1的蛋白表达水平与血瘀组比均有所下降(P<0.05)。其中灵甲胶囊可以抑制OPN及PAI-1的蛋白表达，对OPN蛋白表达的抑制作用较复方鳖甲软肝片明显(P<0.05)。
4、血瘀型肝纤维化模型及肝纤维化模型OPN的基因表达均明显上调(P<0.05)，血瘀型肝纤维化动态观察组各时间段的 OPN 的基因表达较正常组明显上调(P<0.01)。灵甲胶囊对OPN基因表达的有一定的下调作用，但较血瘀组无统计学意义。
结论：
1．血瘀型肝纤维化模型大鼠肝组织OPN及PAI-1的蛋白表达水平较肝纤维化模型高，说明OPN及PAI-1的表达与肝脏损伤程度密切相关。
2．血瘀型肝纤维化模型形成过程中，随着肝脏损伤程度和炎症浸润程度的加重，OPN的表达显著增强，免疫组化定位发现以炎症浸润部位的巨噬细胞胞浆的阳性表达最显著。提示OPN可能通过对巨噬细胞的趋化作用，引起巨噬细胞的聚集，从而参与局部累积的枯否氏细胞和巨噬细胞对于星状细胞的激活和肝纤维化级联反应。
3．血瘀型纤维化形成过程中随着OPN的表达增强，PAI-1的表达也逐渐增强。提示OPN的蛋白表达增强可能会促进PAI-1的表达增强，PAI-1表达增强会抑制纤溶系统对包括OPN在内的细胞外基质成分的降解，从而加速纤维化的形成。两者在血瘀型纤维化的形成过程中有协同效应。
4．灵甲胶囊可能通过抑制OPN的表达间接降低PAI-1的蛋白表达水平，所以表现为对PAI-1蛋白表达水平的降低幅度较OPN大，从而使PAI-1对细胞外基质降解的抑制作用减弱，增加细胞外基质的降解，发挥抗纤维化作用。灵甲胶囊可以抑制OPN的蛋白表达，同时对OPNmRNA表达也有一定的下调作用，低于血瘀组的表达，但无统计学意义。提示灵甲胶囊发挥抗纤作用可能与基因转录或翻译后的修饰环节有关，如缩短蛋白半衰期从而实现对蛋白表达的抑制作用。