【摘 要】
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[背景]急性缺血性卒中是全世界致死率、致残率最高的疾病之一,现在临床上有效的干预方法十分有限。脑缺血可引起从能量剥夺到细胞死亡的级联反应,其中主要包括兴奋性毒性、氧
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[背景]急性缺血性卒中是全世界致死率、致残率最高的疾病之一,现在临床上有效的干预方法十分有限。脑缺血可引起从能量剥夺到细胞死亡的级联反应,其中主要包括兴奋性毒性、氧化应激和炎症反应。炎症反应发生较晚、持续时间较长,对神经元细胞死亡和后期神经修复都有重要的调节作用,因而有希望成为卒中治疗的重要靶标。在缺血性卒中治疗的研究中,干细胞引起了广泛关注。干细胞不仅能分化为神经细胞、胶质细胞、内皮细胞重新构建脑内网络结构,促进脑功能恢复,而且参与抑制炎症、免疫调节、促进血管再生、营养作用等过程。根据缺血性卒中的差异性以及干细胞干预的方式和时间不同,其发挥神经保护作用的机制发生动态性的变化。[目的]我们前期实验结果显示：人脐带间充质干细胞human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cells, hUC-MSCs)能够通过调控外周免疫反应,保护缺血性脑损伤。在此基础上,本课题试图阐明hUC-MSCs对脑内小胶质细胞活化、炎症反应的影响,并对其调控小胶质细胞活化的机制进行探讨,为hUC-MSCs应用于临床奠定理论基础。[方法]随机将ICR小鼠分为假手术组(sham组)、MCAO后NS处理组(MCAO+NS)和MCAO后hUC-MSCs处理组(MCAO+hUC-MSCs);制备MCAO模型90min后,均予以再灌注处理；再灌注后30min分别通过尾静脉途径缓慢注射hUC-MSCs 4×106/ml×0.5ml或等体积的NS。(1)再灌注后24h、72h和1w分别进行各组小鼠神经功能缺损程度评分(Neurological Severity Score,NSS),检测脑含水量、TTC染色,从而评估小鼠行为功能缺损程度、脑水肿程度以及脑梗死体积； (2)用Q-PCR方法检测梗死侧炎症因子IL-1β、TNF-α、 IL-17 和 IL-10 mRNA水平,反应小鼠脑皮层内炎症变化；(3)免疫荧光方法分别检测脑皮层内小胶质细胞活化标记物ED-1、神经元-小胶质细胞的CD200、 CD200R和CCL21、CXCR3的表达情况； (4)Q-PCR方法检测脑皮层内神经元-小胶质细胞的CD200、CD200R和CCL21、CXCR3 mRNA的表达水平；(5)为进一步探讨hUC-MSCs调控小胶质细胞活化的机制,用Q-PCR方法检测脑皮层内TWEAK 和 IL-4 mRNA水平。[结果]1、hUC-MSCs处理对缺血性卒中具有神经保护作用；2、hUC-MSCs能够有效减轻缺血性卒中后脑炎症反应；3、hUC-MSCs有效抑制脑缺血后小胶质细胞活化；4、hUC-MSCs通过神经元-小胶质细胞crosstalk调控小胶质细胞活化；5、hUC-MSCs可能通过TWEAK、IL-4分别调控神经元CCL21、CD200的表达。[结论]hUC-MSCs通过调控神经元-小胶质细胞crosstalk，抑制脑缺血后小胶质细胞过度活化诱导的炎症反应,从而发挥脑保护作用。
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