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肺癌又称原发性支气管肺癌,是起源于支气管粘膜上皮的恶性肿瘤,是严重威胁人民生命和健康的恶性肿瘤之一。手术、放疗、化疗及靶向治疗是肿瘤的主要治疗手段,但副作用大,晚期肺癌治疗的有效率低。近年来,中医药治疗肺癌得到了大家的广泛认可,中药所含成分具有多样性,通过多渠道、多靶点综合治疗是中医药治疗肺癌的优势,中医药治疗肺癌不仅能够改善患者临床症状,增强患者的免疫力,提高生活质量,而且具有稳定病灶,延长生存期等特点。中医药治疗肺癌的机制可能与多靶点有关。树突状细胞是决定免疫系统中适应性免疫是否被激活的关键细胞,作为最主要的抗原呈递细胞(Antigen-presentingcells,APC),不仅发挥呈递抗原的作用,还可以为T细胞活化和分化提供多种必需信号,从而塑造免疫应答。肿瘤相关树突状细胞(Tumorassociateddendriticcells,TDCs)是在肿瘤微环境中,髓系树突状细胞的一系列亚型在肿瘤发生时最先迁移到肿瘤部位,识别肿瘤细胞而诱导的树突状细胞称为肿瘤相关树突状细胞,具有抑制免疫作用。我们前期的研究表明,肺瘤平膏可以通过上调DCs表面相关膜分子的表达,增加免疫突触的形成诱导其成熟,促使未成熟的DC向MDC分化,促进迁移,提高CD3+、CD4+T细胞的表达,抑制CD8+T细胞表达,提高CD4+/CD8+细胞比值等机制调节DCs抗原呈递功能发挥抗肿瘤作用。因此我们大胆的推测,中药肺瘤平膏可能通过改变TDCs相关表型,进一步抑制Treg细胞(Regulatorycells)的表达,从而激活Th1细胞和CTL应答,发挥抗肿瘤作用。
研究目的
通过观察中药肺瘤平膏对肿瘤相关树突状细胞表型及相关通路蛋白表达的影响,初步验证肺瘤平膏发挥抗肿瘤作用的机制可能是通过抑制PI3K/AkT/mTOR通路逆转TDCs表型,发挥抗肿瘤作用。
研究方法
1.通过小动物活体成像等技术观察中药肺瘤平膏对Lewis肺癌模型小鼠瘤体抑制作用及对小鼠体重的影响;
2.通过流式细胞技术检测肿瘤相关树突状细胞、T细胞及Treg细胞表型CD11c+、CD40+、MHC-Ⅱ+、CD80+、CD86+、CD3+、CD4+、CD8+、CD25+、Foxp3+的表达,观察肺瘤平膏对肿瘤相关树突状细胞、T细胞及Treg细胞的调控作用;
3.通过WesternBlot技术检测肿瘤组织中PI3K、AkT、p-AkT、mTOR、p-mTOR蛋白表达量,观察肺瘤平膏对PI3K/AkT/mTOR通路的影响。
研究结果
1.小动物活体成像结果显示肺瘤平膏对Lewis肺癌荷瘤小鼠在第21天时,较对照组相比,肺瘤平膏中剂量组显著降低了小鼠瘤体的p/sec/cm2/sr,有统计学意义。获取瘤体称重计算抑瘤率:与control组比较,FLP-M组瘤重明显减小(P<0.05),
其余各组之间无明显差异,FLP-L组、FLP-M组、FLP-H组抑瘤率分别为:24.56%、32.27%、27.39%;说明肺瘤平膏中剂量组对小鼠瘤体的抑制效果最好。
2.肺瘤平膏对Lewis肺癌荷瘤小鼠瘤体在第14天、21天时有明显的抑制作用,显著降低了小鼠瘤体的p/sec/cm2/sr,较对照组相比,差异具有统计学有意义(p<0.01)。第21天处死小鼠,获取瘤体称重进行计算抑瘤率,肺瘤平膏组、环磷酰胺组、肺瘤平膏联合环磷酰胺组抑瘤率分别为:30.86%、46.59%、51.04%;但肺瘤平膏组小鼠体重明显优于环磷酰胺组及模型对照组,且差异有统计学意义。
3.肺瘤平膏可以提高肿瘤相关树突状细胞表面表型CD11c+、CD40+、MHC-Ⅱ+、CD80+、CD86+的表达,尤以CD80+提高最为显著,且与对照组相比差异具有统计学意义。
4.肺瘤平膏组CD3+、CD4+T细胞表达增高,较对照组相比,差异均具有统计学意义;较对照组相比,肺瘤平膏组能显著减少小鼠脾脏中Treg细胞的表达,差异具有统计学意义(p<0.05).
5.肺瘤平膏对PI3K、Akt蛋白表达有较显著的抑制作用,较对照组相比,差异具有统计学意义;药物干预组p-Akt表达较对照组降低,肺瘤平膏、环磷酰胺及其联合用药较对照组相比均有显著差异,各组p-mTOR表达较对照组相比无明显差异,而mTOR表达降低,肺瘤平膏及其联合环磷酰胺组较对照组具有显著差异,差异具有统计学意义。
研究结论
1.通过小动物活体成像、抑瘤率的计算得出肺瘤平膏对Lewis肺癌荷瘤小鼠瘤体有明显的抑制作用,中剂量效果最佳,同时可以改善小鼠体重;
2.通过流式细胞术检测发现肺瘤平膏可以上调肿瘤相关树突状细胞表面表型的表达,提高CD3+、CD4+、CD8+T细胞的表达,同时降低Treg细胞的百分比;
3.通过WesternBlot技术检测肺瘤平膏上调肿瘤相关树突状细胞表面表型的作用可能与调控PI3K/AkT/mTOR通路有关。
研究目的
通过观察中药肺瘤平膏对肿瘤相关树突状细胞表型及相关通路蛋白表达的影响,初步验证肺瘤平膏发挥抗肿瘤作用的机制可能是通过抑制PI3K/AkT/mTOR通路逆转TDCs表型,发挥抗肿瘤作用。
研究方法
1.通过小动物活体成像等技术观察中药肺瘤平膏对Lewis肺癌模型小鼠瘤体抑制作用及对小鼠体重的影响;
2.通过流式细胞技术检测肿瘤相关树突状细胞、T细胞及Treg细胞表型CD11c+、CD40+、MHC-Ⅱ+、CD80+、CD86+、CD3+、CD4+、CD8+、CD25+、Foxp3+的表达,观察肺瘤平膏对肿瘤相关树突状细胞、T细胞及Treg细胞的调控作用;
3.通过WesternBlot技术检测肿瘤组织中PI3K、AkT、p-AkT、mTOR、p-mTOR蛋白表达量,观察肺瘤平膏对PI3K/AkT/mTOR通路的影响。
研究结果
1.小动物活体成像结果显示肺瘤平膏对Lewis肺癌荷瘤小鼠在第21天时,较对照组相比,肺瘤平膏中剂量组显著降低了小鼠瘤体的p/sec/cm2/sr,有统计学意义。获取瘤体称重计算抑瘤率:与control组比较,FLP-M组瘤重明显减小(P<0.05),
其余各组之间无明显差异,FLP-L组、FLP-M组、FLP-H组抑瘤率分别为:24.56%、32.27%、27.39%;说明肺瘤平膏中剂量组对小鼠瘤体的抑制效果最好。
2.肺瘤平膏对Lewis肺癌荷瘤小鼠瘤体在第14天、21天时有明显的抑制作用,显著降低了小鼠瘤体的p/sec/cm2/sr,较对照组相比,差异具有统计学有意义(p<0.01)。第21天处死小鼠,获取瘤体称重进行计算抑瘤率,肺瘤平膏组、环磷酰胺组、肺瘤平膏联合环磷酰胺组抑瘤率分别为:30.86%、46.59%、51.04%;但肺瘤平膏组小鼠体重明显优于环磷酰胺组及模型对照组,且差异有统计学意义。
3.肺瘤平膏可以提高肿瘤相关树突状细胞表面表型CD11c+、CD40+、MHC-Ⅱ+、CD80+、CD86+的表达,尤以CD80+提高最为显著,且与对照组相比差异具有统计学意义。
4.肺瘤平膏组CD3+、CD4+T细胞表达增高,较对照组相比,差异均具有统计学意义;较对照组相比,肺瘤平膏组能显著减少小鼠脾脏中Treg细胞的表达,差异具有统计学意义(p<0.05).
5.肺瘤平膏对PI3K、Akt蛋白表达有较显著的抑制作用,较对照组相比,差异具有统计学意义;药物干预组p-Akt表达较对照组降低,肺瘤平膏、环磷酰胺及其联合用药较对照组相比均有显著差异,各组p-mTOR表达较对照组相比无明显差异,而mTOR表达降低,肺瘤平膏及其联合环磷酰胺组较对照组具有显著差异,差异具有统计学意义。
研究结论
1.通过小动物活体成像、抑瘤率的计算得出肺瘤平膏对Lewis肺癌荷瘤小鼠瘤体有明显的抑制作用,中剂量效果最佳,同时可以改善小鼠体重;
2.通过流式细胞术检测发现肺瘤平膏可以上调肿瘤相关树突状细胞表面表型的表达,提高CD3+、CD4+、CD8+T细胞的表达,同时降低Treg细胞的百分比;
3.通过WesternBlot技术检测肺瘤平膏上调肿瘤相关树突状细胞表面表型的作用可能与调控PI3K/AkT/mTOR通路有关。