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目的研究槲皮素(Quercetin)对雷公藤甲素(Triptolide,TP)引起肝损伤的保护性作用,同时初步探讨其作用机制。方法1、槲皮素对TP诱导急性肝损伤的保护性作用。50只雌性C57BL/6小鼠随机分为5组,即正常对照组、TP模型组、槲皮素低剂量组(20mg/kg)、槲皮素中剂量组(50mg/kg)、槲皮素高剂量组(80mg/kg)。用药组每日给予不同剂量的槲皮素,连续十天,每日一次;正常对照组和模型组给予等量的5‰CMC-Na,末次给药4h后,除正常组外其余各组均灌胃给予500μg/kg的TP建立小鼠急性肝损伤模型,22h后取血,处死小鼠,取肝备用。分别检测小鼠血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平,HE染色观察小鼠肝组织病理改变,分光光度法检测肝组织匀浆中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及还原型谷胱甘肽(GSH)的表达水平。2、急性肝损伤及槲皮素应用后Th17/Treg细胞平衡变化及TLR4-MyD88-NF-κB和Tim-3信号通路对Th17/Treg细胞平衡变化的影响。为研究肝损伤发生及槲皮素应用后Th17/Treg细胞平衡变化情况,采用elisa和rt-pcr法检测小鼠体内th17、treg相关细胞因子白细胞介素il-17、il-10水平;免疫组化和rt-pcr法检测肝脏中维甲酸孤儿核受体(ror-γt)、叉头状转录因子(foxp3)表达,以此判断th17/treg细胞比率;采用westernblot分别检测tlr4、myd88、nf-κb和tim-3的表达水平。3、tlr4通路阻断剂tak-242对th17/treg平衡变化的影响。雌性c57bl/6小鼠随机分为3组,每组10只,分别为正常对照组、tp模型组、tak-242(1mg/kg)组。除空白组外,模型组及tak-242组均灌胃给予500μg/kg的tp建立小鼠急性肝损伤模型,在给予tp前1h,tak-242组小鼠腹腔注射tak-242,对照组及模型组给予等量生理盐水。22h后取血,处死小鼠,无菌留取肝组织备用。分别检测小鼠血清中alt、ast水平,he染色观察小鼠肝组织病理改变情况,分光光度法检测肝组织匀浆中mda、sod及gsh的表达水平;采用elisa和rt-pcr检测小鼠体内th17、treg相关细胞因子白细胞介素il-17、il-10水平;免疫组化和rt-pcr法检测肝脏中维甲酸孤儿核受体(ror-γt)、叉头状转录因子(foxp3)表达,以此判断th17/treg细胞比率;采用westernblot分别检测tlr4、myd88、nf-κb和tim-3的表达水平。结果1、与正常对照组相比,tp组小鼠血清中alt、ast、mda含量显著升高,伴有sod、gsh水平明显降低,病理切片提示有较多炎性细胞浸润,提示肝损伤模型构建成功。槲皮素低剂量组alt、ast、MDA水平略有降低,SOD、GSH水平稍有升高,但不明显;槲皮素中剂量组ALT、AST、MDA含量降低,SOD、GSH水平升高;槲皮素高剂量组ALT、AST、MDA水平降低更明显,SOD、GSH水平显著升高,病理切片显示肝细胞坏死程度明显减轻,提示槲皮素高剂量组对TP诱导的肝损伤具有一定的保护作用。2、ELISA及RT-PCR结果均显示,与模型组相比,槲皮素高剂量组能显著降低IL-17表达水平,明显升高IL-10表达水平;免疫组化结果显示模型组Foxp3表达水平显著降低,ROR-γt表达水平明显升高,给药后可以纠正这一失衡。Western Blot结果显示模型组小鼠TLR4、MyD88、NF-κB水平显著升高,Tim-3水平降低;给予高剂量槲皮素后可以降低TLR4、MyD88、NF-κB表达,Tim-3表达水平升高。3、给予TAK-242后,血清中ALT、AST水平及肝脏组织中MDA、IL-17及TLR4、MyD88、NF-κB的表达显著降低,肝脏组织中SOD、GSH、IL-10及Tim-3的表达水平升高。肝脏病理切片显示给予TAK-242后肝脏坏死程度明显减轻。结论1、槲皮素对TP诱导急性肝损伤具有一定的保护性作用。2、免疫肝损伤发生后Th17/Treg比率失衡,槲皮素应用后可以纠正这种失衡,且这种保护作用与抑制TLR4-MyD88-NF-κB通路活化及激活Tim-3信号通路相关。3、TLR4通路阻断后可通过调节Th17/Treg失衡纠正肝损伤。