论文部分内容阅读
目的:通过建立C57BL/6小鼠肺癌骨转移模型，探讨补肾抗癌方对肺癌骨转移小鼠及PTHrP、TGF-β、Smad4表达的影响，为中医药治疗肺癌骨转移提供一定依据。方法:取LL/2-Luc-M38肺癌荷瘤小鼠瘤块，接种于C57BL/6小鼠，随机分为五组:模型组、帕米膦酸钠组、补肾抗癌组、温阳抗癌组、滋阴抗癌组。次日给药，连续给药21天。期间观察各组小鼠体重、生存状态，行为等表现情况，并进行小鼠右胫骨活体成像摄片及X线摄片，观察骨组织破损情况。取小鼠右胫骨组织，分为两部分，分别浸入福尔马林和脱钙液脱钙中，石蜡包埋切片，HE染色、免疫组化、RT-PCR方法检测PTHrP、TGF-β、Smad4蛋白及其mRNA的表达情况。
结果:
1.各组小鼠体重变化:第12天后，各组体重均有下降，与滋阴抗癌组相比，帕米膦酸二钠组体重差异有统计学意义（p＜0.05）。第20天，与模型组相比，补肾抗癌组、温阳抗癌组体重下降不显，差异有统计学意义(p＜0.05）;与补肾抗癌组相比，帕米膦酸二钠组、滋阴抗癌组体重下降明显，差异有统计学意义(p＜0.05)。
2.各组小鼠生存状态:第12天后模型组、帕米膦酸二钠组小鼠体型瘦小明显、喜群居，毛色较各中药组无光泽、呈缕状，各组均出现小鼠造模侧下肢活动不利;第16天后，模型组、帕米膦酸二钠组小鼠活动度明显下降，对外来刺激反应明显降低，各中药组对外界刺激反应降低但高于模型组和帕米膦酸二钠组;第20天，滋阴抗癌组与补肾抗癌组小鼠活动度较第12天后下降明显，但仍高于模型组和帕米膦酸二钠组。
3.IVIS图像及骨X线片显示:与模型组相比，帕米膦酸二钠组、补肾抗癌组及温阳抗癌组能减少肺癌细胞发生骨转移，并且能减轻溶骨性骨破坏现象。
4.各组肺癌骨转移小鼠PTHrP、TGF-β、Smad4蛋白表达情况:与模型组相比，帕米膦酸二钠组、补肾抗癌组及温阳抗癌组的PTHrP、TGF-β蛋白表达较低，差异均有统计学意义（p＜0.05）。与模型组相比，帕米膦酸二钠组、补肾抗癌组及滋阴抗癌组的Smad4蛋白表达均较高，差异均有统计学意义(p＜0.05）;与温阳抗癌组相比，帕米膦酸二钠组Smad4蛋白表达升高明显，差异有统计学意义(p＜0.05)。
5.各组肺癌骨转移小鼠PTHrP、TGF-β、Smad4mRNA表达情况:与模型组相比，帕米膦酸二钠组、补肾抗癌组及温阳抗癌组的PTHrP、TGF-βmRNA表达均较低，差异具有统计学意义(p＜0.05）;与模型组相比，帕米膦酸二钠组、补肾抗癌组及滋阴抗癌组的Smad4mRNA表达均较高，差异均有统计学意义(p＜0.05）。
结论:
1.补肾抗癌方及其拆方和帕米膦酸二钠均可抑制肿瘤生长，抗肿瘤骨转移，且中药组可明显改善小鼠的生存状态。
2.补肾抗癌方及其拆方抗骨转移肿瘤细胞生长的机制可能是通过降低PTHrP、TGF-β的表达及提高Smad4的表达而发挥作用。