野菊花、枸杞多糖的分离纯化、结构鉴定及其药理活性研究

来源 :上海中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:fenglu84
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本论文包括两部分内容:一、对野菊花(Chrysanthemum indicum L.)和枸杞(Lycium barbarum L.)的多糖成分进行了研究;二、对从野菊花和枸杞中分离纯化得到的均一多糖进行活性筛选研究。   第一部分内容包括:采用沸水提取、乙醇沉淀和冷冻干燥的方法获得野菊花和枸杞粗多糖。野菊花粗多糖(CIP)经DEAE-Sepharose Fast Flow凝胶柱层析得到5个多糖部位CIP-0、CIP-1、CIP-2、CIP-3和CIP-4,枸杞粗多糖也得到5个多糖部位LBP-0、LBP-Ⅰ、LBP-Ⅱ、LBP-Ⅲ和LBP-Ⅳ;然后根据各分段部位的分子量分布情况选用合适的凝胶柱层析,从野菊花中分离得到1个中性均一多糖CIP-C和2个酸性均一多糖CIP-3-b和CIP-Ⅱ-a,且这三个均一多糖均是首次从野菊花中分离得到,从枸杞中首次分离得到1个酸性果胶多糖LBP-Ⅱ-b;通过各种化学方法(糖组成分析、部分酸水解、甲基化分析等)和光谱学方法(13C-NMR、IR、HPGPC、GC-MS等)对上述这四个均一多糖的一级结构进行了解析。结果表明:①CIP-C为一分子量为8.0×103道尔顿的一个中性多糖,其主链是β-D-1,4-Manp、β-D-1,6-Glcp和β-D-1,4-Galp组成,而α-1,5-Araf连接形成阿拉伯聚糖支链或与1,4-Galp的O-3位相连形成阿拉伯半乳聚糖支链;②CIP-3-b是一典型的鼠李半乳糖醛酸聚糖Ⅰ型酸性果胶类多糖,分子量为1.2×104道尔顿,主链包括1,4-连接的D-GalpA构成的无分支的半乳糖醛酸聚糖(光滑区)、通过D-GalpA与L-1,2-、L-1,2,4-Rhap交替相连构成的含有较多分支的鼠李半乳糖醛酸聚糖(毛发区)和Xy1以非还原末端连接在D-GalpA主链上形成的木半乳糖醛酸聚糖(毛发区),而阿拉伯聚糖和阿拉伯半乳聚糖是CIP-3-b的侧链的主要组成,通过Rhap残基的O-4位与主链相连;③CIP-Ⅱ-a和LBP-Ⅱ-b也属于鼠李半乳糖醛酸聚糖Ⅰ型(RGI)酸性果胶类多糖,结构与CIP-3-b具有相似之处,但是由于两者的糖醛酸含量较CIP-3-b偏高,因而1,4-GalA相连形成的“光滑区”(半乳糖醛酸聚糖)构成CIP-Ⅱ-a和LBP-Ⅱ-b主链的主要组成部分,Rha的含量相对较少,所以只是在1,4-GalpA的主链上的部分位置上嵌入1,2-Rha,且CIP-3-b的中性糖含量相对较高,揭示CIP-3-b相对于CIP-Ⅱ-a和LBP-Ⅱ-b分支结构更加多样化和复杂化。   第二部分内容包括:对野菊花均一多糖CIP-C、CIP-3-b、CIP-Ⅱ-a和枸杞均一多糖LBP-Ⅱ-b进行了抗血管生成活性、DPPH清除活性的筛选研究。结果表明:①CIP-3-b在50μg/ml浓度下对HEMC-1细胞管腔形成具有明显的抑制作用,且MTT实验表明CIP-3-b在50μg/ml的浓度以下对HEMC-1细胞没有毒性,说明CIP-3-b在低浓度下具有较好的抗血管生成活性,而其它均一多糖抗血管生成的效果不明显;②CIP-3-b和LBP-Ⅱ-b均有一定的抗氧化活性,且DPPH清除率与其浓度呈正相关,但非线性相关。
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