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慢性肾脏疾病严重威胁着人类的健康,其主要特征是肾脏纤维化。肾纤维化是指在各种致病因子如炎症、各种损伤、药物和遗传因素等的作用下,间质细胞及细胞间质增多,尤其是基质蛋白质合成增加,基质降解受到抑制造成细胞外基质的大量堆积导致的肾小球硬化和肾间质纤维化。肾纤维化是各种不同病因的慢性肾病进展到终末期肾病(end-stage renal disease ESRD)的最终共同病变过程。
由于肾纤维化是一种多致病因素、多机制参与的复杂疾病,目前临床上尚无专门治疗肾纤维化的药物出现。而中药成分多,在抗病过程中产生协同作用,尤其对多环节、多因素的复杂疾病具有综合治疗优势。因此,从中医角度出发,开发中药资源,从传统中药中寻找治疗肾纤维化的有效物质是药学工作者面临的重要任务。黄芩是我国著名的传统中药,具有清热燥湿,泻火解毒,止血安胎等功效。我们的前期试验中发现,黄芩总苷元提取物对于氯化汞所致大鼠肾纤维化具有一定改善作用,因此,本实验拟采用单侧输尿管结扎手术建立大鼠肾纤维化模型,从常规药理学角度考察黄芩提取物及SC-5对肾纤维化的影响,利用免疫组织化学技术作进一步治疗机制研究,最后采用代谢组学技术对药效进行进一步评价。
主要实验内容和结果如下:
1.采用单侧输尿管结扎术建立大鼠肾纤维化模型,通过大鼠体重、肾体比、血肌酐、尿素氮、肌酐清除率、肾组织羟脯氨酸含量等指标的测定以及肾组织病理形态学观察,考察了黄芩提取物及SC-5的抗肾纤维化作用,结果表明,二者均可改善大鼠肾纤维化状况。
2.采用免疫组化技术考察黄芩提取物及SC-5治疗大鼠肾纤维化的可能机制。结果发现,二者可显著降低肾组织中TGF-β1的蛋白表达,并可显著降低Smad2的蛋白表达,表明黄芩提取物和SC-5可能通过抑制TGF-β1/Smad信号转导通路来发挥抗肾纤维化作用。
3.利用代谢组学技术对模型组和假手术组血清样本进行分析,验证模型制作是否成功,并对黄芩提取物和SC-5进行药效学评价。经多维统计分析,可清晰地发现模型组与假手术组之间代谢模式的差异,说明模型组大鼠的代谢网络确实发生了变化。
4.从模型组大鼠相对假手术组大鼠血清中的差异代谢物中,发现木糖醇、D-半乳糖和油酸可能会成为诊断肾纤维化发生的潜在标志物。黄芩提取物和SC-5组分别位于模型组和假手术组之间,表明二者具有改善肾纤维化作用。