论文部分内容阅读
雌酮是一种主要的内源性激素，对人体的正常生长发育等生理功能起到重要的调控作用。体液中的雌酮的含量可帮助监测孕情以及诊断妇科疾病。四氢孕三烯酮是最近才发现的一种新型的类固醇兴奋剂，对其的有力的监控有助于发扬公平的体育精神。本论文以雌酮及四氢孕三烯酮为分析对象，研究两者的免疫分析方法。论文包括以下几个部分：
第一章概述了雌酮及四氢孕三烯酮的分析方法研究进展。对于雌酮，简要介绍了雌酮的生理功能，较为详细的介绍了色谱法，免疫分析法及免疫传感器方法在测定雌酮方面的应用。对于四氢孕三烯酮，对其结构，危害以及代谢过程进行了介绍，同时对现有的检测方法进行了讨论。在此基础上，提出了对该两种类固醇激素进行免疫分析研究的方法。
第二章复苏雌酮单克隆抗体杂交瘤细胞株，通过小鼠体内诱生的方法制备雌酮的单克隆抗体，对抗体的亲和性等进行了表征。利用抗原修饰的原子力显微镜探针及单克隆抗体修饰的基质测定了抗原与抗体之间的相互作用力，并对试验的条件进行了讨论。
第三章免疫动物以获得雌酮的多克隆抗体，并对抗体的亲和性等性质进行了表征。通过导电高分子层的聚合将抗体包裹在电极表面，制备了可用于测定雌酮的免疫传感器。实验优化了免疫传感器的工作条件条件，及抗原抗体的反应时间等，发现在pH值为7.2时，免疫传感器表现出较好的电化学响应，并且20分钟的时间已经足以在传感器表面形成抗原抗体复合物。在优化的实验条件下，该免疫传感器对雌酮的测定范围为0.05-1.0μg/mL。
第四章实验合成了四氢孕三烯酮的全抗原并且通过免疫获得了其多克隆抗体，进而以此抗体为基础建立了ELISA方法用于检测THG，检出限达到了0.25 ng/mL。研究进一步利用亲和素生物素的放大体系建立了更灵敏的测定THG的ELISA方法。采用生物素化抗体的ELISA方法的检出限为0.05 ng/mL，在检出限上优于其它基于质谱方法的检出限(液相色谱.质谱-质谱联用方法为5 ng/nL，气相色谱一质谱联用方法0.5 ng/mL)，是目前检测THG的最灵敏方法。
第五章利用二氧化钛纳米颗粒涂层研究了蛋白在二氧化钛基质上的吸附，并对吸附的条件进行了改进。实验中通过PLL对二氧化钛表面的改性，提高了蛋白在二氧化钛表面的吸附量，建立了竞争性的免疫传感器，并对免疫传感器的工作条件包括pH值等，进行了讨论，发现在pH值为6.5时，硫堇的浓度为1.0：mM，过氧化氢浓度为6.0 mM时，免疫传感器表现出较好的电化学响应，并且35分钟的时间已经足以在传感器表面形成抗原抗体复合物。在优化的实验条件下，该免疫传感器对THG的测定范围为2-45ng/mL，其检出限达到1.2 ng/mL。
第六章以THG与BSA的偶联物为免疫原，采用传统的杂交瘤抗体制备技术获得了针对THG的单克隆抗体；该抗体属于IgM亚型，亲和常数为5.3×10<7>L/mol。同时以获得的抗体为基础，建立了THG的酶免疫分析方法，检出限达到了0.5ng/mL。
第七章总结论文工作，对未来工作进行展望。