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本研究以家蚕和小菜蛾为试虫,测定了虫螨腈对家蚕和小菜蛾的毒性差异,利用多种P450诱导剂,筛选出了对家蚕和小菜蛾体内P450含量和活性具有显著诱导作用的诱导剂及其最佳使用浓度,比较了P450诱导剂和抑制剂处理家蚕和小菜蛾后,虫螨腈对家蚕和小菜蛾致毒作用的改变,探讨了P450在虫螨腈致毒和代谢中的作用机制。主要结果如下:
1.采用食下毒叶法和浸虫法测定了虫螨腈对2龄家蚕的毒性,48h结果表明,虫螨腈对家蚕的LC50值分别为240.05 mg·L-1和292.42 mg·L-1。采用浸叶法和浸虫法测定了虫螨腈对4龄小菜蛾的毒力,48h结果表明,虫螨腈对小菜蛾的LC50值分别为14.787mg·L-1和20.359 mg·L-1。食下毒叶法/浸叶法测得的毒力明显大于浸虫法,说明虫螨腈的胃毒作用大于触杀作用。虫螨腈对小菜蛾的毒性与其对家蚕毒性相差近20倍,说明虫螨腈对家蚕和小菜蛾具有明显的毒性选择性。
2.用染有诱导剂的叶片饲喂4龄家蚕和小菜蛾,发现家蚕和小菜蛾体内P450含量能够被诱导,并且P450含量随诱导剂浓度和诱导时间的改变而发生变化。用10000mg·L-1的苯巴比妥、巴比妥、五甲基苯和香叶醇诱导处理家蚕一定时间后,家蚕体内P450含量分别达到10.656、9.9515、6.2774和7.1656 pmol·mg pro-1,分别为对照的3.31、3.09、1.95和2.22倍。用10000mg·L-1的苯巴比妥、巴比妥、五甲基苯和香叶醇诱导处理小菜蛾一定时间后,测得小菜蛾体内P450含量分别为0.2471、0.1219、0.1297和0.1306 nmol·mg pro-1,分别是对照的4.08、2.01、2.14和2.16倍。对家蚕和小菜蛾来说,苯巴比妥是最有效的P450含量诱导剂。萘和地塞米松对家蚕和小菜蛾P450含量没有明显的诱导作用。通过测定发现,家蚕和小菜蛾体内P450含量差异显著,正常情况下小菜蛾体内P450含量是家蚕的20倍,诱导后可达80倍。
3.诱导剂诱导家蚕和小菜蛾一定时间后,以对硝基苯甲醚为底物,测定家蚕和小菜蛾体内P450 O-脱甲基酶活性。结果发现,诱导剂对家蚕和小菜蛾体内P450活性诱导作用不同。苯巴比妥和五甲基苯诱导家蚕48h后,家蚕体内P450 O-脱甲基酶活性分别为4.6930和4.1237 pmol·mgpro-1·min-1,分别为对照的1.50和1.32倍。巴比妥和香叶醇对家蚕P450活性诱导作用不显著。四种诱导剂对小菜蛾P450 O-脱甲基酶活性都具有诱导作用。在10000 mg·L-1浓度下,苯巴比妥、巴比妥、五甲基苯和香叶醇处理小菜蛾48h后测得小菜蛾体内P450 D-脱甲基酶活性分别为0.4219、0.3157、0.3286和0.3186 nmol·mg pro-1·min-1,分别是对照的2.09、1.57、1.63和1.58倍。同时发现,小菜蛾与家蚕体内P450活性存在显著差异,两者相差近100倍。
4.采用食下毒叶法和浸叶法测定诱导剂+虫螨腈和抑制剂+虫螨腈对家蚕和小菜蛾的毒力发现,苯巴比妥、巴比妥、五甲基苯和香叶醇诱导后虫螨腈对家蚕的毒性上升,48h增效倍数分别为1.54、1.43、1.67和1.78倍。四种诱导剂诱导后虫螨腈对小菜蛾的毒力明显降低,48h LC50值分别为57.337、53.892、90.653和65.307 mg·L-1,毒力分别较对照降低了2.94、2.77、4.66、3.35倍。P450抑制剂(PBO)能够增大虫螨腈对家蚕毒性,PBO+虫螨腈48h LC50值为171.79 mg·L-1,增效倍数为1.48倍。PBO能够降低虫螨腈对小菜蛾的毒力,PBO+虫螨腈对小菜蛾48h LC50值为31.391mg·L-1,增效倍数为0.63。
5.以苯巴比妥为P450诱导剂,设定10.0、5.0和2.5 mg·L-1三个虫螨腈浓度测定虫螨腈对家蚕和小菜蛾呼吸代谢的影响。结果表明,在这些浓度下虫螨腈对家蚕呼吸速率的影响较小,并且苯巴比妥能够降低由虫螨腈引起的家蚕呼吸速率的增大;虫螨腈能够显著影响小菜蛾的呼吸速率,药剂处理后小菜蛾呼吸速率增大,10mg·L-1虫螨腈处理48h后,小菜蛾呼吸速率迅速降低,并出现死亡。这是由于虫螨腈进入小菜蛾体内转化为起杀虫作用的阻断剂,抑制呼吸,阻断能量供应。苯巴比妥诱导能够引起小菜蛾呼吸作用的增强,对小菜蛾代谢虫螨腈产生显著的影响。苯巴比妥+10mg·L-1虫螨腈处理组48h后呼吸速率依然保持正常。