四种不同来源巨噬细胞在M1和M2状态下IL-10的表达研究

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背景:炎症细胞可以分泌TNF-α,IFN-γ等促炎因子,也可以分泌IL-4,IL-10等抗炎因子。IL-10可以抑制促炎性因子表达,抑制抗原提呈,抑制炎症细胞的激活,黏附等多方面发挥强大的抗炎作用。随着研究的深入,发现多种细胞均能分泌IL-10,其中包括单核细胞,巨噬细胞。巨噬细胞是免疫系统的重要组成部分,可以帮助机体抵御微生物的入侵,清除体内的肿瘤细胞以及坏死和凋亡的细胞。目前巨噬细胞分类有多种,而世界上公认的巨噬细胞分型方式主要是:M1型巨噬细胞和M2型巨噬细胞,即:在LPS和IFN-γ作用下的巨噬细胞由静止状态极化为M1型;在IL-4刺激下极化为M2型。迄今尚无M1型和M2型巨噬细胞分型的明确标准和定义,而是跟据其表达的某些生物学标志物和发挥某些生物学功能来划分。TNF-α,IL-6,IL-8等促炎细胞因子是M1型巨噬细胞表达的主要标志物,M1型巨噬细胞发挥促进炎症反应,清除坏死和凋亡的细胞,吞噬病菌等病原微生物等作用;M2型巨噬细胞主要表达抗炎因子如YM1,Arg1,FIZZ1等标志物,发挥抑制炎症过度反应,促进伤口愈合,利于组织修复等作用。大多数研究巨噬细胞的文献,主要用的巨噬细胞有腹腔巨噬细胞,骨髓间充质干细胞诱导的巨噬细胞和巨噬细胞系,而且根据文献报道都说明M2型巨噬细胞能够高表达IL-10,因而也将IL-10看做是M2型巨噬细胞的标志物之一。  目的:探讨四种来源巨噬细胞优劣,及在M1和M2状态IL-10的表达。  方法:用LPS100 ng/ml+IFN-γ20 ng/ml和IL-420 ng/ml分别刺激四种巨噬细胞,即:RAW264.7巨噬细胞系、原代腹腔巨噬细胞、巯基乙酸盐诱导的腹腔原代巨噬细胞、骨髓间充质干细胞诱导的巨噬细胞。运用ELISA试剂盒分别检测0h,2h,4h,8h,16h时,四种类型巨噬细胞IL-10蛋白浓度的变化。运用RT-PCR检测四种类巨噬细胞IL-10和刺激4h时TNF-α和Arg1的mRNA表达。用流式细胞仪检测四种类巨噬细胞的细胞纯度。  结果:成功复制和比较了四种类型巨噬细胞的M1型状态和M2型状态。四种类型巨噬细胞在M1状态下,IL-10表达均高于M2状态下IL-10的表达。TNF-α在M1状态下高表达,Arg1在M2状态下高表达。  结论:同其他类型巨噬细胞相比,未用巯基乙酸盐刺激诱导的腹腔原代巨噬细胞是研究有关巨噬细胞炎症反应比较好的细胞模型。TNF-α和Arg1是区分巨噬细胞M1,M2状态的比较好生物学标记物。IL-10不能作为巨噬细胞M2型的可靠标记物。
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