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凝血酶和凝血因子Xa在凝血级联反应中具有非常关键的作用，其抑制剂是临床上针对血栓性疾病的重要治疗药物。中药丹参和川芎是常见的活血化瘀类中药，因具有抗凝血作用而用于治疗心血管类疾病。因此，从丹参和川芎中筛选凝血酶及凝血因子Xa抑制剂具有重要意义。本论文研究主要采用LC-MS检测结合多元统计分析的方法筛选丹参及川芎中具有凝血酶及凝血因子Xa抑制作用的活性成分，并通过分子对接分析活性成分与酶之间的相互作用。论文主要包括四个部分的内容。
第一部分为文献综述，首先简要介绍了丹参及川芎的主要化学成分与药理作用，其次总结了凝血酶及凝血因子Xa抑制剂的研究进展，并对多元统计分析在天然产物研究中的应用进行了概述。最后提出本论文研究的主要内容及意义。
第二部分为LC-MS检测结合多元统计分析表征丹参中的凝血酶及凝血因子Xa抑制剂。首先是丹参不同极性提取物（乙酸乙酯部分、正丁醇部分、75%乙醇提取萃余物和水提物）对凝血酶及凝血因子Xa抑制活性的测定，并对活性最强的乙酸乙酯部分进行柱色谱分离得到SC1~SC5五个组分。其次是对各组分（SC1~SC5）进行LC-MS分析并测定其对凝血酶及凝血因子Xa的抑制活性，采用主成分分析（Principal Component Analysis,PCA）和正交偏最小二乘判别分析（Orthogonal Partial Least Squares Discriminant Analysis,OPLS-DA）处理LC-MS分析与活性测定的数据，筛选出4个差异性标志化合物，经LC-MS/MS鉴定为隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、二氢丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA。最后通过分子对接分析发现它们均位于凝血酶及凝血因子Xa的活性位点，能与ALA190、ASP189、GLY216、GLY219等氨基酸残基发生相互作用，结合能均低于-7kcal·mol-1。
第三部分是LC-MS检测结合多元统计分析表征川芎中的凝血酶及凝血因子Xa抑制剂。所用方法与第二部分相同，首先测定了川芎不同极性提取物（乙酸乙酯部分、正丁醇部分、75%乙醇提取萃余物和水提物）的凝血酶及凝血因子Xa抑制活性，其中乙酸乙酯部分具有最佳凝血酶抑制活性，而正丁醇部分对凝血因子Xa的抑制作用最好，因此分别进行柱色谱分离，各得到五个组分（EA-SC1至EA-SC5，BA-SC1至BA-SC5），基于各组分的LC-MS分析与活性测定的数据分别拟合PCA及OPLS-DA模型，从中筛选出具有潜在凝血酶抑制活性的洋川芎内酯A、Z-藁本内酯、阿魏酸和洋川芎内酯Ⅰ（IC50为768.84μM），以及具凝血因子Xa抑制活性的异绿原酸A。通过分子对接研究发现，川芎EA部分中筛选的4个成分能与凝血酶活性位点周围的ALA190、ASP189、GLY216、GLY219等氨基酸残基相互作用，且结合能均低于-5kcal·mol-1。异绿原酸A可与凝血因子Xa活性位点结合，结合能为-9.39kcal·mol-1，经活性验证可知，其IC50为558.55μM。
论文的第四部分是结论和展望。本论文主要采用基于LC-MS分析的多元统计分析方法筛选丹参及川芎中的抑制凝血酶及凝血因子Xa的活性成分，并对其进行分子对接分析，该研究结果为补充丹参和川芎的抗凝血机制提供了参考。与活性导向的植物化学分离方法相比，该方法能减少多级分离过程中的溶剂损耗，缩短操作周期，可进一步应用于其它中药中具有凝血酶或凝血因子Xa抑制活性成分的预测，有助于发现新的凝血酶和/或凝血因子Xa抑制剂。
第一部分为文献综述，首先简要介绍了丹参及川芎的主要化学成分与药理作用，其次总结了凝血酶及凝血因子Xa抑制剂的研究进展，并对多元统计分析在天然产物研究中的应用进行了概述。最后提出本论文研究的主要内容及意义。
第二部分为LC-MS检测结合多元统计分析表征丹参中的凝血酶及凝血因子Xa抑制剂。首先是丹参不同极性提取物（乙酸乙酯部分、正丁醇部分、75%乙醇提取萃余物和水提物）对凝血酶及凝血因子Xa抑制活性的测定，并对活性最强的乙酸乙酯部分进行柱色谱分离得到SC1~SC5五个组分。其次是对各组分（SC1~SC5）进行LC-MS分析并测定其对凝血酶及凝血因子Xa的抑制活性，采用主成分分析（Principal Component Analysis,PCA）和正交偏最小二乘判别分析（Orthogonal Partial Least Squares Discriminant Analysis,OPLS-DA）处理LC-MS分析与活性测定的数据，筛选出4个差异性标志化合物，经LC-MS/MS鉴定为隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、二氢丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA。最后通过分子对接分析发现它们均位于凝血酶及凝血因子Xa的活性位点，能与ALA190、ASP189、GLY216、GLY219等氨基酸残基发生相互作用，结合能均低于-7kcal·mol-1。
第三部分是LC-MS检测结合多元统计分析表征川芎中的凝血酶及凝血因子Xa抑制剂。所用方法与第二部分相同，首先测定了川芎不同极性提取物（乙酸乙酯部分、正丁醇部分、75%乙醇提取萃余物和水提物）的凝血酶及凝血因子Xa抑制活性，其中乙酸乙酯部分具有最佳凝血酶抑制活性，而正丁醇部分对凝血因子Xa的抑制作用最好，因此分别进行柱色谱分离，各得到五个组分（EA-SC1至EA-SC5，BA-SC1至BA-SC5），基于各组分的LC-MS分析与活性测定的数据分别拟合PCA及OPLS-DA模型，从中筛选出具有潜在凝血酶抑制活性的洋川芎内酯A、Z-藁本内酯、阿魏酸和洋川芎内酯Ⅰ（IC50为768.84μM），以及具凝血因子Xa抑制活性的异绿原酸A。通过分子对接研究发现，川芎EA部分中筛选的4个成分能与凝血酶活性位点周围的ALA190、ASP189、GLY216、GLY219等氨基酸残基相互作用，且结合能均低于-5kcal·mol-1。异绿原酸A可与凝血因子Xa活性位点结合，结合能为-9.39kcal·mol-1，经活性验证可知，其IC50为558.55μM。
论文的第四部分是结论和展望。本论文主要采用基于LC-MS分析的多元统计分析方法筛选丹参及川芎中的抑制凝血酶及凝血因子Xa的活性成分，并对其进行分子对接分析，该研究结果为补充丹参和川芎的抗凝血机制提供了参考。与活性导向的植物化学分离方法相比，该方法能减少多级分离过程中的溶剂损耗，缩短操作周期，可进一步应用于其它中药中具有凝血酶或凝血因子Xa抑制活性成分的预测，有助于发现新的凝血酶和/或凝血因子Xa抑制剂。