【摘 要】
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钙调磷酸酶催化亚基及其系列剪切体的研究;钙调磷酸酶催化亚基(CNA)包括两个部分:催化结构域和调节片段;调节片段又分为三个功能结构区:调节亚基CNB结合区(BBH)、钙调素CaM结
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钙调磷酸酶催化亚基及其系列剪切体的研究;钙调磷酸酶催化亚基(CNA)包括两个部分:催化结构域和调节片段;调节片段又分为三个功能结构区:调节亚基CNB结合区(BBH)、钙调素CaM结合区(CBD)和自抑制区(AI).为了研究三个结构功能区在酶活中的作用,我们构建了突变体CNAa、CNAac和CNAaci,其中CNAa只含有催化结构域,CNAac含有催化结构域和CaM结合区,CNAaci含有催化结构域、CaM结合区和自抑制区.分别用p-nitrophenylphosphate(pNPP)和<32>P-labeled R<,Ⅱ> peptide(同位素标记的RⅡ多肽)作底物,检测了CNA和这些剪切体的活性、动力学性质、金属离子对酶活的影响和酶的内源荧光及CD光谱性质.Loop7在钙调磷酸酶活性中的重要性研究;Loop7是钙调磷酸酶的催化亚基中的一段肽链,连接着两个β-片层的β-12和β-13,大约包括8个氨基酸(从Y311到K318);从晶体结构看,这个Loop7离催化活性中心较远,不会直接参与酶的催化反应.金属离子对钙调磷酸酶催化亚基和催化结构域的影响研究;钙调磷酸酶(CN)是一个异二聚体,包括催化亚基CNA和调节亚基CNB.已有实验研究表明CN的活性对金属离子有依赖性;在体外,Mn<2+>和Ni<2+>对酶的活性是最重要的金属离子.为了研究CN的功能受调于金属离子,我们进行了一系列离子(包括金属离子和一些非金属离子)对CNA及其催化结构域CNAa活性的影响研究.
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