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中药瓜蒌为葫芦科植物栝楼Trichosanthes kirilowii Maxim或双边栝楼Trichosanthes rosthornii Harms的干燥成熟果实。近年来,瓜蒌化学成分以全果实类为研究对象的的较少,药理作用的研究也主要集中在单味药或者复方药上,能够体现植物药用有效成分的研究工作还不够深入,其药效的物质基础也不明确。本实验采用Xanthine-NBT显色反应对收集到的瓜蒌进行心肌缺血再灌注损伤的保护作用的活性筛选,确定其活性部位,然后进行了比较系统的化学成分研究,并在此基础上建立了瓜蒌薄层鉴别的方法和HPLC含量测定的方法。
1.化学成分研究
通过对双边瓜蒌的乙酸乙酯部位进行系统的化学成分研究,从中分离鉴定了16个化合物,其中14个为首次从栝楼属植物中分得,3个脂肪酸:丁二酸(succinic Acid)(1)、天师酸(tianshic Acid)(2)、2,7-dimethyl-2,4-diene-deca-α,ω-diacid-8-O-β-D-glu(3);2个酚酸类成分:邻羟基苯甲酸(o-Hydroxybenzoic acid)(4)、对羟基苯甲酸(p-Hydroxybenzoic acid)(5);2个生物碱类成分:、1-乙酰基-3-羧基-β-咔啉(6)、酒渣碱(Flazine)(7);2个木脂素类成分:异落叶松脂醇(isolariciresinol)(8)、开环异落叶松脂醇(secoisolariciresinol)(9);3个降倍半萜类成分:3,5-Dihydroxy-6,7-megastigmadien-9-one(10)、6-Hydroxy-4,7-megastigmadiene-3,9-dione(11)、3-Hydroxy-5,6-epoxy-7-me gastigmadiene-9-one(12);另外还有黄酮香豆素类等成分:金圣草素(chrysoeriol)(13)、补骨脂素(psoralen)(14)。
通过对双边瓜萎甲醇提取物进行系统的化学成分研究,从中分离鉴定了9个化合物,其中2个新的查尔醇苷类化合物:2-methoxy-4’,4,6-trihydroxy-α’-chalcanol-α,β-epoxide-4-O-β-D-glc、2,β-dimethoxy-α,4’,4,6-tetrahydroxy-α’-chalcanol-4-O-β-D-glc;另外还有3个降半萜类成分和1个生物碱(核苷)类成分为首次从栝楼属植物中分离得到:6,9,11-Trihydroxy-4,7-megastigmadiene-3-one(1)、6,9-Dihydroxy-4,7-megastigmadien-3-one-9-O-[-α-L-Apifuranosyl-(1→2)-β-D-glucopyranoside](2)、6,9,11-Trihydroxy-4,7-megastigmadien-3-one-11-O-β-D-glucopyranoside(3)、腺苷(Adenosine)(4)。
采用黄嘌呤-NBT显色反应体系对分离得到的化合物的心肌缺血再灌注损伤的保护作用进行活性筛选,结果显示化合物均有一定的作用,其中化合物金圣草素(TTA-7)、6-Hydroxy-4,7-megastigmadiene-3,9-dione(TTA-28)、3-Hydroxy-5,6-epoxy-7-megastigmadiene-9-one(TTA-30)活性与阳性药别嘌呤醇接近,IC50分别为4.67,11.65,13.49μM,阳性药为6.13μM。
2.质量标准研究
以酒渣碱为指标,建立了瓜蒌中酒渣碱的薄层鉴别方法;以3,29二苯甲酰基栝楼仁三醇为指标,建立了瓜蒌HPLC含量测定的方法;同时增加了瓜蒌药材的粉末显微鉴别以及水分、总灰分和水溶性浸出物的测定。