论文部分内容阅读
目的：初步研究新化学合成药物TPh对宫颈癌Hela细胞的作用并探讨其作用机制。 方法：（1）采用MTT法检测不同浓度TPh（12.5μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、120μg/mL）作用不同时间后对Hela细胞增殖的抑制作用；（2）使用流式细胞仪检测TPh对宫颈癌Hela细胞周期的影响；（3）利用细胞划痕实验来观察TPh对宫颈癌Hela细胞迁移能力的影响；（4）采用Annexin-V FITC/PI双染检测TPh对宫颈癌Hela细胞凋亡的影响；（5）利用JC-1染色观察TPh对宫颈癌Hela细胞线粒体膜电位的影响；（6）采用Western blotting法检测凋亡蛋白Caspase-3，Caspase-8、Caspase-9及基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9蛋白表达情况。 结果：（1）MTT法实验结果显示：TPh对宫颈癌Hela细胞增殖有抑制作用，随着浓度的增加，时间的延长，抑制作用明显延长；（2）细胞周期结果显示：与空白对照组相比，TPh各剂量组G0/G1期细胞比例逐渐增加，G2/M期细胞比例有不同程度的减少；（3）细胞划痕实验和MMP-2、MMP-9蛋白检测结果显示：TPh各剂量组Hela细胞伤口愈合速度慢于空白对照组，且实验组宫颈癌Hela细胞中MMP-2、MMP-9蛋白表达的水平显著低于空白对照组。（4）Annexin-V FITC/PI双染检测结果显示：与空白对照组相比，不同浓度TPh作用24h后，凋亡的Hela细胞不同程度增多且呈药物剂量依赖性；（5）JC-1染色检测结果显示：与对照组相比，线粒体膜电位出现不同程度降低且呈药物浓度相关性。（6）细胞凋亡相关因子检测结果显示：TPh以剂量依赖性的方式增加凋亡相关蛋白Caspase-3，Caspase-8、Caspase-9的表达。各组与空白对照组相比有显著性差异。 结论：（1）不同浓度的TPh可抑制Hela细胞增殖，且呈剂量依赖性关系；（2）TPh可使G0/G1期Hela细胞阻滞，且抑制G0/G1期Hela细胞向S期及G2/M期转化，从而抑制Hela细胞的增殖；（3）TPh各剂量组Hela细胞伤口愈合速度慢于对照组，且MMP-2、MMP-9蛋白表达水平显著低于空白对照组，说明TPh可抑制Hela细胞侵袭和转移；（4）随着TPh浓度的增加，TPh可呈剂量依赖性促进Hela细胞凋亡；（5）TPh可使线粒体膜电位降低，通透性增加，从而诱导Hela细胞早期凋亡；（6）TPh可促进宫颈癌Hela细胞Caspase-3，Caspase-8，Caspase-9因子表达，诱导细胞凋亡。