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黄酮类化合物是酸枣仁发挥多种药理作用的主要活性物质，以酸枣仁黄酮单体斯皮诺素为例，其具有镇静催眠、抗焦虑、抗氧化、保护脑神经、增强学习记忆等多种药理作用。并且大量研究表明，植物多糖可以通过调节肠道菌群的组成、改变肠道屏障的通透性，调节外排转运蛋白的表达水平和Ⅱ相代谢酶的含量来改善黄酮类物质的吸收，延长黄酮类物质的作用时间。本文在酸枣仁多糖调节肠道菌群组成的研究基础上，从酸枣仁多糖与黄酮吸收互作的角度出发，综合利用多种生物化学及分子生物学手段，考察酸枣仁多糖(ZSS polysaccharide)对斯皮诺素吸收的影响及其机制。
本研究运用HPLC?MS/MS的方法检测斯皮诺素在小鼠血液中的含量，取C57BL/6小鼠的结肠探究酸枣仁多糖对小鼠结肠中的外排转运蛋白、紧密连接蛋白的表达水平的和Ⅱ相代谢酶的含量的影响；分别在浓度和时间两个梯度下，检测酸枣仁多糖对Caco-2细胞活力、Caco-2细胞中吸收相关蛋白表达水平的影响；考察灌胃酸枣仁多糖小鼠的肠道菌群培养上清液对Caco-2细胞活力和Caco-2细胞中的吸收相关蛋白表达水平的影响。主要成果如下：
（1）建立了高效、灵敏的检测斯皮诺素的HPLC?MS/MS方法，结果如下：斯皮诺素的浓度与峰面积比值之间具有良好的线性关系（5～400ng?mL-1），方程为y=0.0102x+0.1646R2=0.9993；精密度RSD值均小于5%；准确度RE的绝对值小于7%；提取回收率在98.01%～102.69%之间；基质效应在95.56%～113.03%之间；稳定性RSD值均小于4%。对小鼠血液样本进行检测，发现灌胃28天的酸枣仁多糖会抑制斯皮诺素在小鼠体内的吸收。但灌胃酸枣仁多糖28天后，同时给药酸枣仁多糖和斯皮诺素，此时的酸枣仁多糖不再对斯皮诺素的吸收起到调节作用。
（2）通过MTT实验，发现酸枣仁多糖在不同的浓度梯度和时间梯度下对Caco-2细胞的生长没有任何毒性作用。酸枣仁多糖可以升高外排转运蛋白在Caco-2细胞中的表达水平，随着酸枣仁多糖浓度的升高和孵育时间的延长，P-gp和MRP2的表达水平，先增高后降低。对于紧密连接蛋白来说，Occludin的表达水平，随着酸枣仁多糖浓度的增大逐渐升高，随着孵育时间的延长先增高后降低；Claudin-1的表达水平只随着时间的延长而升高。对Ⅱ相代谢酶的来说，酸枣仁多糖对磺酸基转移酶（SULT）没用作用，但能上调尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶（UGT）在Caco-2细胞中的含量。
（3）对C57BL/6小鼠的结肠进行研究，发现小鼠长期灌胃酸枣仁多糖能够显著上调结肠中P-gp、MRP2和Occludin的蛋白表达水平，但对Claudin-1蛋白的表达水平没有显著影响。结果与酸枣仁多糖对Caco-2细胞的体外实验结果一致。对结肠中SULT、UGT的含量进行检测，发现长期喂食酸枣仁多糖使小鼠结肠中SULT、UGT的含量微弱升高，但没有显著性差异。取小鼠粪便制备肠道菌群培养上清液，对其OD值和pH值进行测定，发现其活性良好。用MTT法测定肠道菌群培养上清液对Caco-2细胞活力的影响，发现浓度为100μL?mL-1时，肠道菌群培养上清液对Caco-2细胞的生长具有毒性作用，在无毒的条件下，选取最大浓度值50μL?mL-1进行后续实验，发现两组中P-gp、MRP2、Occludin和Claudin-1的蛋白表达水平都没有显著性差异。用ELISA实验检测Caco-2细胞中的Ⅱ相代谢酶，发现两组间SULT的含量没有显著性差异，但长期食用酸枣仁多糖的小鼠肠道菌群培养上清液明显降低了Caco-2细胞中UGT的含量。
本研究运用HPLC?MS/MS的方法检测斯皮诺素在小鼠血液中的含量，取C57BL/6小鼠的结肠探究酸枣仁多糖对小鼠结肠中的外排转运蛋白、紧密连接蛋白的表达水平的和Ⅱ相代谢酶的含量的影响；分别在浓度和时间两个梯度下，检测酸枣仁多糖对Caco-2细胞活力、Caco-2细胞中吸收相关蛋白表达水平的影响；考察灌胃酸枣仁多糖小鼠的肠道菌群培养上清液对Caco-2细胞活力和Caco-2细胞中的吸收相关蛋白表达水平的影响。主要成果如下：
（1）建立了高效、灵敏的检测斯皮诺素的HPLC?MS/MS方法，结果如下：斯皮诺素的浓度与峰面积比值之间具有良好的线性关系（5～400ng?mL-1），方程为y=0.0102x+0.1646R2=0.9993；精密度RSD值均小于5%；准确度RE的绝对值小于7%；提取回收率在98.01%～102.69%之间；基质效应在95.56%～113.03%之间；稳定性RSD值均小于4%。对小鼠血液样本进行检测，发现灌胃28天的酸枣仁多糖会抑制斯皮诺素在小鼠体内的吸收。但灌胃酸枣仁多糖28天后，同时给药酸枣仁多糖和斯皮诺素，此时的酸枣仁多糖不再对斯皮诺素的吸收起到调节作用。
（2）通过MTT实验，发现酸枣仁多糖在不同的浓度梯度和时间梯度下对Caco-2细胞的生长没有任何毒性作用。酸枣仁多糖可以升高外排转运蛋白在Caco-2细胞中的表达水平，随着酸枣仁多糖浓度的升高和孵育时间的延长，P-gp和MRP2的表达水平，先增高后降低。对于紧密连接蛋白来说，Occludin的表达水平，随着酸枣仁多糖浓度的增大逐渐升高，随着孵育时间的延长先增高后降低；Claudin-1的表达水平只随着时间的延长而升高。对Ⅱ相代谢酶的来说，酸枣仁多糖对磺酸基转移酶（SULT）没用作用，但能上调尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶（UGT）在Caco-2细胞中的含量。
（3）对C57BL/6小鼠的结肠进行研究，发现小鼠长期灌胃酸枣仁多糖能够显著上调结肠中P-gp、MRP2和Occludin的蛋白表达水平，但对Claudin-1蛋白的表达水平没有显著影响。结果与酸枣仁多糖对Caco-2细胞的体外实验结果一致。对结肠中SULT、UGT的含量进行检测，发现长期喂食酸枣仁多糖使小鼠结肠中SULT、UGT的含量微弱升高，但没有显著性差异。取小鼠粪便制备肠道菌群培养上清液，对其OD值和pH值进行测定，发现其活性良好。用MTT法测定肠道菌群培养上清液对Caco-2细胞活力的影响，发现浓度为100μL?mL-1时，肠道菌群培养上清液对Caco-2细胞的生长具有毒性作用，在无毒的条件下，选取最大浓度值50μL?mL-1进行后续实验，发现两组中P-gp、MRP2、Occludin和Claudin-1的蛋白表达水平都没有显著性差异。用ELISA实验检测Caco-2细胞中的Ⅱ相代谢酶，发现两组间SULT的含量没有显著性差异，但长期食用酸枣仁多糖的小鼠肠道菌群培养上清液明显降低了Caco-2细胞中UGT的含量。