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在转基因鱼的研究中，一般采用随机插入的方法。基因在受体鱼基因组中随机整合，严重制约了转基因鱼纯系的快速建立和转基因的稳定遗传，是转基因鱼研究函待解决的首要问题。转基因定点整合技术，即基因打靶技术是解决上述问题的重要途径，但是基因打靶存在打靶效率太低的问题。本研究小组已建立了体外动物细胞的多位点基因打靶技术，并构建了用于鳜鱼的体内多位点基因打靶的打靶载体，本研究将完成多位点基因打靶技术的鳜鱼体内实验研究。
以鳜鱼rDNA基因(rRNA的基因)及其间隔序列作为同源重组引导序列，构建含干扰素的基因打靶载体，以其间隔序列为靶位点，针对鱼类胚胎发育特点，采用精子介导技术进行多位点基因打靶，最终获得定点整合干扰素基因的鳜鱼，并建立一套适用于动物的基因定点敲入的体内基因打靶技术。主要研究内容如下：
(1)采用组织培养方法，获得鳜鱼头。肾淋巴细胞和脾淋巴细胞，采用脂质体介导的方法使多位点基因打靶载体在鳜鱼的细胞上实行基因转移。采用正负筛选方法，利用筛选药物G418和GCV筛选转染后的细胞筛选两周后，对存活细胞进行DNA水平和RNA水平鉴定。结果证明了hlFN基因在鳜鱼细胞上实现了定点整合和稳定表达。
(2)利用精子介导法将已经线性化处理后的多位点基因打靶载体在鳜鱼的胚胎上实行基因转移。
(3)根据靶位点定点整合正负筛选原理，利用筛选药物G418和GCV筛选与富集定点整合后的阳性鱼胚或鱼苗，结果成功孵化出106尾转基因鳜鱼鱼苗。
(4)培育6个月后，取20尾转基因鳜鱼进行鉴定。采用PCR、测序等方法进行定点整合的鉴定。结果表明：6尾检测到已转入基因——hlFN，其中有3尾实现了定点整合。
本研究率先将多位点基因打靶技术应用到转基因鱼的研究中，建立一套适用于鱼类的高效、安全的基因打靶技术，并获得外源基因定点整合并表达的鳜鱼。