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H9亚型禽流感是目前危害我国养禽业的主要AIV亚型,以引起病鸡体温升高和呼吸道病变,成年鸡产蛋量下降,畸形蛋增多为主要特征。近年来,有研究表明在进行H9亚型禽流感病毒免疫后,仍不断有疑似病例发生,且极易与新城疫发生混合感染,造成经济损失的同时给防疫安排工作带来了很大的挑战。因此,将禽流感和新城疫病毒进行联合免疫,以防止交叉感染,提高免疫效率,成为如今规模化养殖场免疫的重要手段。本研究从疑似低致病性禽流感发病鸡场采集病料,分离鉴定出H9亚型禽流感病毒株XY-14株。将此毒株灭活后与新城疫Ⅳ系进行联合免疫,以不同免疫方式产生抗体水平的变化为研究重点,了解此毒株与新城疫病毒联合免疫产生抗体的快慢与持续期。本研究主要包括以下几个方面:1、2014年从信阳鸡场采集疑似低致病性禽流感发病的病料,接种SPF鸡胚,分离培养病毒。通过HA(血凝试验)、HI(血凝抑制试验)和RT-PCR方法初步筛到1株H9亚型禽流感病毒。将病毒进行终点有限稀释克隆纯化后50倍浓缩蔗糖密度梯度离心提纯,取纯化好的病毒用禽流感通用引物和H9亚型禽流感通用引物进行扩增,在大约229bp和730bp位置得到明亮的条带,与预期大小一致。使用特异性引物扩增HA、NA、NP、M、NS基因片段,分别在1740bp、1470bp、1565bp、1027bp和890bp位置出现明亮的条带,与预期大小一致,因此可确定该毒株为H9亚型。将此毒株命名为A/Chicken/XinYang/XY-14/2014(H9 Subtype),简称为XY-14株。2、XY-14株的HA效价为10log2,HI H9效价为10log2,然后用禽流感病毒H9亚型血清进行中和试验,收集的尿囊液没有血凝性。3、对该毒株进行毒力测定,做ICPI(1日龄鸡脑内接种致病指数统计)ICPI=0.18;和IVPI(鸡静脉接种致病指数)IVPI=0;说明XY-14株属于弱毒株。4、将XY-14株病毒进行灭活处理,单独免疫鸡,第3周抗体滴度达到峰值12log2,持续直到第22周抗体水平仍达到10.33log2。结果表明该灭活毒单独免疫,能够使鸡产生抗体,且能以很高的抗体滴度提供持续数周;与新城疫Ⅳ系苗联合免疫0.5mL/羽,第2周便产生ND和AIV H9抗体;ND抗体在第3周达到峰值11log2,持续到22周仍有6log2的抗体水平;AIV H9抗体水平峰值于第4周出现,高达11.33log2。NDⅣ系滴鼻点眼同时再以0.3mL/羽进行联合毒株免疫时,不但能同时产生抗两种病毒的抗体,还能显著提高ND抗体滴度,但不对抗H9 HI水平产生影响,说明联合免疫的两种病毒之间互不干扰;联合免疫0.3mL/羽,同时NDⅣ系滴鼻点眼,在本实验中为较适免疫方式。