【摘 要】
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寡孢节丛孢（Arthrobotrys oligospora）是研究捕食线虫真菌和线虫相互作用的代表性菌株，它通过产生具有粘性的捕食器官三维菌网捕食线虫。本论文以该真菌为出发菌株，对信号转导相
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寡孢节丛孢（Arthrobotrys oligospora）是研究捕食线虫真菌和线虫相互作用的代表性菌株，它通过产生具有粘性的捕食器官三维菌网捕食线虫。本论文以该真菌为出发菌株，对信号转导相关的三个蛋白CAMK、PKA和p38MAPK进行了氨基酸序列的功能结构域分析。同时，通过同源重组技术对这三个蛋白的编码基因进行了敲除，并比较了突变菌株和野生型菌株在生理、生化性质和侵染能力等方面的差异。本文的研究结果为进一步阐明寡孢节丛孢捕食器官形成的信号调控机制奠定了基础。 主要研究结果为: 1.对三个信号蛋白的氨基酸序列及功能结构域进行了分析和预测，三个蛋白的分子量相差不大，三个蛋白分别含有一个CAMK、PKA和p38MAPK保守的功能结构域，它们的结构相对较为简单。 2.通过电转化酵母和大肠杆菌感受态细胞，构建了三个蛋白编码基因的敲除载体，并运用CaCl2-PEG介导的转化方法，对寡孢节从孢原生质体进行了转化，通过PCR和Southern blot验证，三个基因均获得了阳性转化子，对野生型和敲除突变菌株进行了生长速率、产孢、捕器形成、胞外蛋白酶和抗逆性等方面的比较，结果发现△AoCAMK突变株在菌丝、菌落形态、菌丝生长速率以及捕器形成上与野生菌株比较并没有产生明显变化，但是产孢数量降低;△AoPKA突变菌株与野生菌株相比生长速率变慢，产孢数量明显降低，并且不能产生三维菌网;△AoMAPK突变菌株与野生菌株相比菌丝生长速率变慢，且菌丝形态发生明显变化，产孢以及捕器形成数量减少。 3.不同氮源对突变菌株的影响 非优先氮源NaNO3和Urea能够促进野生菌株及突变菌株的菌丝生长速率，其中Urea能够使气生菌丝明显增多;在含有NaNO3和Urea的培养基上野生菌株及突变菌株的产孢数量明显增加，而且NaNO3和Urea能够诱导突变菌株产生捕器。 本文的创新点: 1.成功敲除了寡孢节从孢中三个信号转导相关蛋白CAMK、PKA和p38MAPK的编码基因，并对野生型及敲除突变株的部分表型和生理生化特征进行了系统的比较，初步推测三种信号蛋白在寡孢节从孢中的作用，并初步证实PKA参与寡孢节丛孢捕食器官形成的信号调控。
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