丽江虫草系统学研究——兼论其抗衰老作用

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本文对采自云南省丽江市玉龙县宝山乡高寒村的一种新鲜野生虫草进行形态鉴定,通过分离菌核组织,得到一菌株。经形态和分子鉴定,该野生虫草及无性型为Haptocillium属一新种,暂命名为Haptocillium lijiangensis H.Yu,Y.D.Dai.&X.Y.Jia。本论文还对丽江虫草无性型菌株Hlyg01培养特性进行实验,测定丽江虫草及无性型化学成分,并对丽江虫草抗衰老作用进行研究。  本实验采用形态分类学方法鉴定丽江虫草及无性型为Haptocillium属一新种,描述其菌落形态、菌丝、产孢结构、分生孢子形态、大小和着生方式等。测定丽江虫草及无性型ITS序列,予以对比,确认菌株Hlyg01为丽江虫草无性型。同时,根据相关专著和文献,在Genebank数据库中,下载47条ITS序列和29条28S、EF-1α和RPB1序列,并与测序序列进行比对。构建ITS系统树和18S、EF-1α和RPB1三基因树,探讨丽江虫草及其无性型的分类地位。  为了解丽江虫草无性型菌株Hlyg01培养特性,本研究以平皿中菌落直径为指标,筛选出菌株Hlyg01最适生长碳源为蔗糖;最适生长氮源为脱脂奶粉;最佳培养基配方为:蔗糖6%,脱脂奶粉1%,KH2PO4:0.04%,MgSO4:0.1%;最适温度为20℃;最适pH为6。  本实验利用分光光度法测定丽江虫草及无性型多糖、D-甘露醇、总皂苷、总黄酮、三萜含量,利用HPLC法测定腺苷、鸟苷、尿苷、肌苷、胸苷、尿嘧啶6种核苷类成分含量,与江西地区和贵州地区古尼虫草及无性型古尼拟青霉及西藏那曲的冬虫夏草含量进行对比。结果显示,丽江虫草无性型菌株Hlyg01多糖含量较高,野生丽江虫草D-甘露醇、胸苷、肌苷、尿嘧啶含量均高于西藏那曲的冬虫夏草。  本论文以果蝇为动物模型,将丽江虫草粉末添加到基础培养基中喂食果蝇。结果发现,喂食低浓度丽江虫草,明显延长果蝇最高寿命(显著水平)、平均寿命和半数死亡时间,表明丽江虫草具有一定的抗衰老作用。同时发现对雌性的效果高于雄性,暗示出丽江虫草对果蝇延缓衰老作用表现出性别差异。  综上所述,本实验通过形态和分子系统发育论证丽江虫草系统分类地位,确认采自云南宝山高寒地区的野生虫草及无性型为Haptocillium属一新种,暂命名为丽江虫草Haptocillium lijiangensis H.Yu,Y.D.Dai.&X.Y.Jia。本研究不仅丰富Haptacillium属物种多样性,同时对其化学成分和果蝇抗衰老实验表明,此虫草真菌还具有较好的应用价值,为深入丽江虫草系统与进化研究及开发利用奠定了基础。
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