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目的：构建含有绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)基因与乙型肝炎病毒(hepatitis B vires，HBV) preS1基因的重组真核表达载体pcDNA3.1-preSl-GFP，观察并检测该重组质粒在小鼠精子内的表达。
方法：采用聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)方法，以pBR322-HBV质粒为模板扩增HBV preS1基因片段，将PCR扩增得到的HBV preS1基因片段与含有GFP的真核表达载体pcDNA3.1-GFP分别进行EcoR I和Xba I双酶切，以T4连接酶过夜连接，经酶切及测序鉴定后，用脂质体LipofectamineTM2000转染小鼠精子，在荧光显微镜下观察GFP有无表达，并应用PCR检测HBV preS1基因的存在。
结果：①利用DNA重组技术将preS1基因插入到pcDNA3.1-GFP质粒中，经双酶切及测序鉴定，成功构建了pcDNA3.1-preS1-GFP真核表达载体；②将重组质粒按一定比例转染小鼠精子后，在荧光显微镜下观察到转染精子头部有较明亮的绿色荧光；③提取转染精子DNA，经PCR扩增得到位于HBV preSl基因区域内长约589bp的片段，与预期一致。
绪论：①以上研究结果证实，重组质粒pcDNA3.1-preS1-GFP已得到成功构建，这为建立新型HBV垂直传递小鼠模型提供了可能；②重组真核表达载体pcDNA3.1-preS1-GFP在小鼠精子内的表达，表明重组质粒pcDNA3.1-preS1-GFP可用于制备转基因小鼠，同时GFP还可作为HBVpreSI基因存在与否的报告基因。因此本研究为建立新的HBV垂直传递小鼠模型，进而更好地研究HBV的垂直传播机制奠定了实验基础。