论文部分内容阅读
目的: 观察针灸对肠易激综合征(irritable bowel syndrome，IBS)大鼠肠道菌群及结肠黏膜炎性细胞因子IL-10、IL-17、IL-23、sIgA、TNF-α、及其受体TNFR1、TNFR2的影响，阐释针灸治疗IBS的作用机制。 方法: 将出生8天的SD雄性大鼠随机分为正常组和造模组。造模组大鼠采用直结肠球囊刺激结合4％芥子油灌肠进行造模，造模结束并鉴定造模成功后将造模组大鼠随机分为5组:模型组、温和灸组、电针组、西药组和益生菌组。温和灸组和电针组分别采用温和灸和电针干预，均取两侧“天枢穴”和“上巨虚穴”。温和灸组每次每穴灸10min，每日1次，共灸7天;电针组采用频率10Hz/2Hz，强度1mA，20min，每日1次，共7天;西药组采用得舒特悬浊液进行灌胃，每日1次，共7天;益生菌组采用双歧三联活菌片悬浊液进行灌胃，每日1次，共7天。治疗前后对大鼠进行腹部撤回反射(AWR)评分观察;采用16S rDNA高通量测序方法观察IBS大鼠肠道菌群的变化;光镜下观察大鼠结肠组织形态学变化;采用免疫组化方法检测大鼠结肠组织IL-10、IL-17、IL-23、sIgA、TNF-α及其受体TNFR1、TNFR2的蛋白表达;采用Western blot方法检测IL-10、IL-17、IL-23、TNF-α及其受体TNFR1、TNFR2蛋白含量。 结果: 1治疗前后A限评分比较:治疗前后各组大鼠的AWR评分随着压力值的增加而升高;相同压力值下，与正常组相比，模型组大鼠的AWR评分显著升高(P＜0.05);同一压力值下，与模型组相比，温和灸组、电针组AWR评分均明显降低(P＜0.05);益生菌组在40、60、80mmHg的压力刺激时，AWR评分与模型组相比，差异有统计学意义(P＜0.05);西药组在60mmHg和80mmHg的压力刺激时，AWR评分与模型组相比，差异有统计学意义(P＜0.05)。 2大鼠结肠组织的形态学观察:正常组大鼠结肠黏膜上皮完整，腺体排列整齐规则。模型组大鼠结肠黏膜上皮尚完整，腺体排列尚规则，黏膜及黏膜下层有炎性细胞浸润。温和灸组大鼠结肠黏膜结构较为完整，腺体排列较为规则。电针组大鼠结肠黏膜结构完整，稍有炎性细胞浸润现象，腺体排列规则。西药组组大鼠结肠黏膜及黏膜下层尚有少许炎性细胞浸润。益生菌大鼠结肠炎性细胞较少，腺体排列规则。 3各组大鼠肠道菌群的变化:(1) OTU分布:门水平:各组大鼠优势菌群为拟杆菌门类、放线菌门类及Candidatus Saccharibacteria。纲水平:各组优势菌群为拟杆菌纲类、芽孢杆菌纲类及变形菌纲、鞘脂杆菌纲和放线菌亚纲类的微生物。目水平:各组大鼠优势菌群为拟杆菌目类、芽孢杆菌目类、乳杆菌目类及鞘脂单细胞目类。在科水平:各组大鼠优势菌群为普雷沃氏菌科、伯克氏菌属科、瘤胃菌科及紫单包菌科和拟杆菌科。属水平上:各组大鼠优势菌群为普雷沃菌属及梭菌属(ⅩⅣ)a、普氏菌属、拟杆菌属、厌氧杆菌属、乳酸菌属。(2)组间对比结果:1)与正常组相比:门水平上，模型组大鼠肠道中拟杆菌门的含量明显高于正常组大鼠，而厚壁菌门和Candidatus Saccharibacteria的含量明显低于正常组大鼠;在属水平上:模型组大鼠肠道中梭菌属Ⅺ、鞘氨醇单胞菌属、水杆菌属、Parasutterella的含量明显高于正常组大鼠;梭菌属(ⅩⅣ)a、梭菌属Ⅳ、螺杆菌属、瘤胃球菌属、Saccharibacteria genera incertae sedis及Butyricicoccus的含量明显低于正常组大鼠。2)与模型组相比:温和灸组在门水平无差异;属水平:温和灸组大鼠肠道中和梭菌属、埃希菌属、Butyricicoccus、Dorea、Enterorhabdus等菌属明显高于模型组，梭菌属Ⅺ、水杆菌属和Alloprevotella的含量明显低于模型组。电针组在门水平上，大鼠肠道中拟杆菌门的含量明显低于模型组大鼠的含量;属水平:枝芽孢杆菌属、Butyricicoccus及Dorea的含量明显高于模型组。西药组在门水平上无差异;在属水平上，大鼠肠道中梭菌属Ⅺ、鞘氨醇单胞菌属、罗斯氏菌属、梭菌属(ⅩⅣ)b、水杆菌属、苏黎士杆属、Parasutterella、Dorea及Allobaculum的含量明显均低于模型组大鼠的含量。益生菌组在门水平上，大鼠肠道中梭杆菌门的含量明显高于模型组大鼠的含量;在属水平上，苏黎士杆属、链球菌属、奈瑟菌属及Lachnospiraceaincertae sedis的含量明显高于模型组大鼠，螺旋菌属、梭菌属Ⅺ、鞘氨酸单胞菌属的含量明显低于模型组。 4针灸对各组大鼠结肠组织中IL-10、IL-17、IL-23、TNFα、TNFR1、TNFR2及sIgA表达水平的检测结果:与正常组相比，模型组大鼠结肠组织IL-17、IL-23、TNF-α、TNFR1及TNFR2的蛋白表达均明显升高，IL-10、sIgA的蛋白表达均显著降低，差异均有统计学意义（P值均＜0.05）;与模型组相比，温和灸组和电针组大鼠结肠组织IL-17、IL-23、TNF-α、TNFR1及TNFR2的蛋白表达均明显升高，温和灸组大鼠IL-10的蛋白表达明显下降，差异均有统计学意义(P值均＜0.05)。 结论: 1.温和灸、电针、西药和益生菌均可显著降低IBS大鼠的AWR评分，改善CRD引起的IBS大鼠内脏高敏感状态，温和灸组和电针组效果优于西药组和益生菌组。 2.模型组大鼠肠道菌群结构被破坏，菌群多样性明显降低，经治疗后温和灸组、电针组和西药组大鼠肠道菌群的多样性明显升高。温和灸和电针能显著改善大鼠肠道菌群的失衡状态。 3.温和灸和电针能显著降低IBS大鼠结肠炎性细胞因子IL-17、IL-23、TNF-α、TNFR1、TNFR2的表达水平，升高IL-10和sIgA的表达水平，减轻肠道炎症反应。