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大豆抗灰斑病菌相关基因的克隆:1.大豆抗灰斑病菌相关基因cDNA片段的克隆及序列分析.以大豆灰斑病菌亲和与非亲和小种接种大豆,利用mRNA差异显示技术分离了大豆抗灰斑病相关基因cDNA片段共74个.通过反向northern,Southern杂交,northern杂交等检测,最后确定了33个抗灰斑病相关cDNA片段.初步分析表明,片段DN23M是Glycine max major latex protein homologue(msg)3′端序列,可能编码了一个PR10/Bet v 1/MLP蛋白家族的病程相关蛋白或抗病应答蛋白;片段DN31M与G.max glycine-rich RNA-binding protein(GRP)有较高同源性,可能是涉及依赖于GRP的mRNA剪切水平上的一种抗性机制;片段DN32M、DN40M和DN43M则显示了与植物凝集素基因的高度同源,其二级结构的分析也表明它们含有一个保守的豆科凝集素(Legume Lectin)的结构域Lectin_legA,但又与已知的大豆凝集素有很大差异,可能是在大豆中存在一种新的凝集素,并参与了大豆对灰斑病菌的抗性机制.2.大豆抗灰斑病菌相关基因cDNA片段反向PCR研究.对已知的大豆抗灰斑病菌相关基因cDNA片段DN45M进行反向PCR分析,从大豆基因组中扩增出该片段两侧序列,得到8425 bp的克隆IPPDN45M-SacI.经测序和序列分析,得到完整的片段IPPDN45M(8575 bp).生物信息学分析(基因预测)表明IPPDN45M中包含了一个完整的基因IPPDN45M-G,其编码的蛋白质IPPDN45M-P可能是一种植物凝集素蛋白或类似物,并包含一个GAL-Lectin活性结构域.hrf1基因在大豆中的表达引发抗病性.hrp基因是植物病原细菌中编码非特异性激发子的一类基因,其产物Harpins可以激发烟草过敏性细胞坏死(hypersensitive cell death,HCD),诱导植物抗病性、抗虫,促进植物生长.该研究利用花粉管通道法,将来自Xanthomonas oryzaepv.oryzae的编码harpin<,Xoo>的基因hrf1转入大豆,得到了不同的转基因株系,检测表明转hrf1基因的大豆对灰斑病有显著抗性,且抗病防卫反应基因lox2、pal1、chs8组成性表达.