CTAB反胶团萃取分离工业脂肪酶的研究

来源 :中国科学院大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kaixin0322
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脂肪酶是工业生产中一种重要的酶类,其分离纯化研究具有重大的应用价值,本论文利用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)反胶团对两种工业脂肪酶(扩展青酶PF868和lipase M)进行萃取分离,研究内容如下:(1)采用单一CTAB反胶团体系对两种脂肪酶进行萃取时,国产脂肪酶在pH9.0左右有最大萃取率,而lipase M在pH10.0左右有最大萃取率,lipase M萃取的主要推动力是静电作用力,而国产脂肪酶萃取的主要推动力是疏水相互作用力;采用CTAB混合反胶团对国产脂肪酶进行萃取时,PEG400、PEG2000、Tween85、TBP、TRPO、BuAc与CTAB形成的混合反胶团的萃取率大于单一CTAB反胶团,lipase M也有类似的结果;两种脂肪酶的萃取率随反胶团相中TBP、TRPO以及BuAc含量增加而增加,而随着Tween的含量增加有一个最大值.(2)采用单一CTAB反胶团体系时,国产脂肪酶的反萃在1mol/L KBr、反萃水相pH值6.0左右有最大值,而lipase M在1mol/L KBr、反萃水相pH值4.5左右有最大值,这可能与两种酶的等电点不同有关;采用CTAB混合反胶团时,TBP、TRPO以及BuAc与CTAB形成的混合反胶团对两种脂肪酶的反萃行为不同,这可能是由于两种酶的反萃推动力不同造成的,在前萃水相pH值为6~10.5的范围内,Tween60、Tween40以及PEG2000与CTAB形成的混合反胶团对国产脂肪酶的反萃率大于单一CTAB反胶团,而几种混合反胶团对lipase M的反萃率均没有单一CTAB反胶团效果好.(3)采用单一CTAB反胶团对两种脂肪酶进行萃取分离时,国产脂肪酶在前萃水相pH值为8.0左右、反萃水相pH值为4.6左右有最高的酶活回收,lipase M在前萃水相pH值为8.0左右、反萃水相pH值为5.0左右有最高的酶活回收;采用TBP、TRPO、BuAc以及Tween与CTAB形成的混合反胶团对两种脂肪酶进行萃取分离时,在前萃水相pH6.6~10.5的范围内,TRPO、TBP以及Tween60和CTAB形成的混合反胶团对国产脂肪酶的酶活回收高于单一CTAB反胶团,并且TRPO+CTAB混合反胶团的酶活回收可以达到72%;对lipase M而言,仅有Tween40和CTAB形成的混合反胶团的酶活回收高于单一CTAB反胶团.
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