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猪表皮生长因子(porcine epidermal growth factor，pEGF)是一种含有53个氨基酸残基的单链多肽生长因子，与人、牛、鼠等动物的表皮生长因子相似，可刺激多种细胞的增殖，主要是内皮和表皮细胞的分化增殖。有文献报道pEGF对提高母猪繁殖率及对抗仔猪断奶产生的应急作用。因此，本研究制备了pEGF的多克隆抗体和单克隆抗体，并初步建立其ELISA检测方法。
试验中采用碳二亚胺法将BSA和pEGF偶联，合成人工免疫原，并用SDS-PAGE和紫外扫描分析对抗原初步鉴定。用合成的免疫原免疫4只新西兰大白兔，经间接ELISA测定，抗体效价最高达到1：128,000。用间接竞争ELISA测定血清特异性，选择特异性好的多抗血清进行纯化，纯化后血清效价达到1：100,000，纯化抗体蛋白浓度为10.0ng/mL。同时用纯化的抗血清对相关的ELISA条件进行优化，确定pEGF的最适包被浓度为0.625μg/mL，对应抗体的工作浓度为1：64,000，酶标二抗的浓度为1：20,000。利用Excel软件对标准曲线进行线性回归，得到IC50为8.73ng/mL，标准曲线在2.185ng/mL～72ng/mL之间线性良好，R2=0.994，且该抗体对参与测试的几种蛋白质除对BSA有反应外对其它都无交叉反应。
用BSA-pEGF免疫原免疫Balb/c小鼠，小鼠效价均达到1：16,000～1：64,000对pEGF也有较好的特异性。选择效价和特异性都较理想的小鼠进行细胞融合。用杂交瘤技术采用有限稀释法经过5次克隆，筛选得到了2株稳定分泌抗pEGF的杂交瘤细胞株。对B8和F102株细胞进行分析鉴定，得出两株细胞上清效价均在1：3,200以上，IC50分别为11.89ng/mL，和19.95ng/mL。F10制备的腹水效价可以达到1：320,000。纯化抗体蛋白浓度为6.9mg/mL。用纯化的抗体建立间接竞争ELISA方法，并用Excel软件对标准曲线进行线性回归，得到IC50为23.98mg/mL，标准曲线在5ng/mL～200ng/mL间线性良好，R2=0.994，该方法的建立为pEGF的临床应用和制剂的开发提供了定量的方法。