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目的:乙型肝炎病毒(HBV)持续感染会导致慢性病毒性肝炎(CHB)、肝硬化和肝癌等疾病,因此防治HBV感染已成为医学界重点关注的问题之一。引起HBV持续感染的原因有很多,具体的机制尚不清楚。从总体上说,包括宿主本身的因素(固有免疫因素、获得性免疫因素)和HBV的变异因素。机体的天然免疫是抵御HBV感染的第一道防线,在抵抗HBV感染中发挥极其重要的作用。近年来相继发现多个与抗病毒有关的免疫因子,主要有A3G(Apolipoprotein B mRNAediting Enzyme, Catalytic Polypeptide-like3G), MOV10(Moloney Leukemia Virus10),TRIM22(Tripartite Motif Protein22)。A3G是新发现的细胞内天然免疫因子,具有抑制HBV复制的能力。MOV10(莫洛尼白血病病毒10)蛋白是RNA解螺旋酶超家族之一,可与A3G以RNA依赖的方式相互作用,在抗逆转录病毒感染中发挥重要作用。因此我们设想MOV10是否也会抑制HBV复制。TRIM22蛋白是近年来发现的具有抑制逆转录病毒复制的作用,在HBV清除的过程中也起到积极作用。为此,本课题以CHB及健康人为研究对象,通过检测慢性乙肝患者及健康人外周血单个核细胞(PBMC)中固有免疫因子A3G、MOV10、TRIM22、IFNα、IFNγ的表达情况,来探讨这些指标与HBV持续感染的关系。 方法: 1.96例慢性乙肝患者,21名健康者采静脉全血用EDTA抗凝。 2.通过Real-time PCR法测定96例慢性乙肝患者血清中HBV-DNA的拷贝数。 3.速率法测定血清中ALT,AST活性。 4.血清中HBsAg,HBsAb,HBeAg,HBeAb,HBcAb用ELISA法半定性。 5.全血PBMC分离及PBMC总RNA的提取。 6.RNA逆转录成cDNA。 7.通过Real-time PCR染料法分别检测96例慢性乙肝患者、21名健康人PBMC中A3GmRNA, MOV10 mRNA, TRIM22 mRNA, IFNα mRNA, IFNγ mRNA的表达水平。 结果: 1.血清临床项目检测结果: (1)慢性乙肝患者HBV-DNA拷贝数>1.0e+5定为高复制表达共62例(log HBV-DNA平均值为7.14±0.72),HBV-DNA拷贝数<1.0e+5定为低复制表达共34例(log HBV-DNA平均值为3.61±0.81)。 (2)HBeAg阳性组的logHBV-DNA拷贝数(7.08±0.84)高于HBeAg阴性组(4.62±1.12),具有统计学意义(P<0.05)。 (3)慢性乙肝患者的ALT活性,AST活性均高于正常对照组,具有统计学意义(P<0.05)。 2.PBMC中各指标mRNA水平检测结果: (1)慢性乙肝组A3G mRNA,MOV10 mRNA,TRIM22 mRNA,IFNαmRNA的表达均低于正常对照组,具有统计学意义(P<0.05或0.01)。(2)HBeAg阳性组MOV10 mRNA低于HBeAg阴性组,且有统计学意义(P<0.01)。而HBeAg阳性组A3GmRNA,TRIM22mRNA,IFNαmRNA的表达与HBeAg阴性组相比无统计学意义。 (3)慢性乙肝患者高复制表达组A3G mRNA,TRIM22 mRNA的表达均高于低复制表达组,有统计学意义(P<0.05)。 (4)慢性乙肝患者ALT>100U/L组与ALT<100U/L组A3G mRNA,MOV10 mRNA,TRIM22 mRNA,IFNαmRNA,IFNγmRNA比较均无统计学意义。 (5)慢性乙肝患者APOBEC3G mRNA,MOV10 mRNA,TRIM22 mRNA,IFNαmRNA,IFNγ mRNA的表达分别与log HBV-DNA做相关性分析,其中只有HBeAg阳性组TRIM22 mRNA与Log HBV-DNA呈负相关(P<0.05),而其它指标在各组均未见与log HBV-DNA有相关性。 (6)慢性乙肝组APOBEC3GmRNA, MOV10 mRNA, TRIM22 mRNA, IFNα mRNA, IFNγ mRNA的表达分别与ALT做相关性分析,各指标与ALT不存在相关性。 (7)各指标间的相关性分析:正常对照组MOV10与IFNα呈正相关(P<0.01); TRIM22与IFNγ呈正相关(P<0.01); A3G与TRIM22呈正相关(P<0.05)。 结论: 1.慢性乙肝患者外周血PBMC中固有免疫因子A3G mRNA,MOV10mRNA,TRIM22 mRNA,IFNα mRNA的表达均低于正常对照组,且有统计学意义。说明慢性乙肝患者这些免疫指标均降低。 2.慢性乙肝患者中高复制表达组A3GmRNA和TRIM22 mRNA水平明显高于低复制组表达组。 3.慢性乙肝患者中HBeAg+组MOV10mRNA的表达量明显低于HBeAg-组。说明MOV10mRNA表达多少与HBeAg存在相关性。 4.正常对照组MOV10mRNA与IFNα mRNA表达量呈正相关,TRIM22mRNA与IFNγ mRNA的表达量呈正相关。